葸酮比色法和酶水解法两种淀粉测定方法的比较研究.pdfVIP

第19卷第3期 湖南文理学院学报 自然科学版 Vbl．19No．3 ofHunan ofArtsand science 2007年9月 Journal ulliversity science NaturalEdition Sep．2∞7 文章编号：1672—6146 2007 03—0034．03 葸酮比色法和酶水解法两种淀粉测定方法的比较研究 郭冬生1，彭小兰2 摘要：实验用蒽酮比色法和酶水解法两种淀粉测定方法分 究，为实验室的淀粉分析测定提供试验依据． 别测定了17种饲料样品的淀粉含量，实验结果表明，两种 1材料与方法 测定方法差异极显著 p O．01 ，但两种测定方法测出的数据 有极显著的强相关关系，相关系数R2 0．9959p 0．叭 ，其1．1实验材料 回归关系为y O．966％_0．7063． 收集常用动物饲料样品17种，包括能量饲料 关冀词：蒽酮比色法；酶水解法；淀粉 玉米、．高粱、小麦、麸皮、次粉 、蛋白质饲料 豆 中图分类号：Q652 文献标识码：A 粕、棉粕、菜粕、大豆、花生饼 和粗饲料 苜蓿、 羊草、玉米秸、稻草粉、啤酒糟、玉米青贮、大豆 淀粉是谷物、籽实和块根块茎饲料中的主要组 秸 ，风干，用40目的筛子进行粉碎，装在广口瓶 成成分，也是动物营养中重要的供能营养物质，淀 中备用．采用《饲料分析及饲料质量检测技术》 杨 粉是饲料分析和食品检测中需要经常测定的营养指 胜，1993 中的方法测定饲料样品的干物质含量． 标之一，因此，淀粉的测定方法除了要求测定结果 1．2实验方法 准确外，还需要操作简便和快捷．丑前，国际上最 1．2；．1墓嗣出色法 经典最准确的淀粉测定方法是瑞典人nlo№． 1986 实验原理：用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶 提出的快速分析测定淀粉的方法 咖睇ll，s‰b：性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀 38 1986 ；224～226 ，在该方法中，样品先后经过粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，葸酮与淀 粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在 热稳定性0【一淀粉酶 n．锄ylase 、淀粉葡萄糖苷酶 640 锄yloglucosidase 和葡萄糖氧化酶 glucoseoxidase nm下的吸光度． 的处理，然后用分光光度计在450nm下比色测定． 试剂配制：80％乙醇溶液；52％高氯酸溶液： 该方法具有准确、快速的优点，缺点是三种酶制剂 葸酮试剂 将0．4g葸酮溶于100mL88％硫酸溶液 在国内很难同时购得，而且酶制剂规格千差万别， 中，现用现配 ；淀粉标准液 将200mg淀粉倒入100 同时由于酶制剂价格昂贵，造成了测定成本会很高， mL烧杯中，加入5 nlL蒸馏水，加入65mL52％高 在一般的饲料食品检测中是不允许的，因此限制了 氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入100mL溶量瓶中， 该方法的推广应用．高氯酸水解一葸酮比色法也是 加水定容，浓度2mg／mL；取上述标准淀粉溶液 国内流行的一种淀粉测定方法，该方法操作简便、 10．00nlL于250 mL溶量瓶中，加水定容，此淀粉 快速，而且成本低廉，适宜于一般的实验室分析操 溶液的浓度为80 ug／札． 作，但用该方法测定纤维含量很高的粗饲料时，测 标准曲线：在洁净的试管，分别加入0．0、10．0、 定结果的可靠性和准确性有待于进一步的考证研究 20．O、40．0、60．O、80．0 ug淀粉标准液，每一个浓度 中华人民共和国国标 GB5009．9．85 中淀粉的测定2个重复，加水调整各试管溶液均为2．00IIlL，在冰 方法 酶水解法 具有其权威性，其分析测定结果也 水中冷却2IIlin，加入6．oonlL蒽酮一硫酸溶液，摇 很具有说服力，但该方法中的试验操作步骤极其繁 匀，在冰水中冷却2lIlin．将试管放入沸水中5IIlin， 琐，也给一般的实验室分析操作带来很多不便，也 各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温．用 2．oo 限制了其推广普及．本试验收集了常用动物饲料17 111L蒸馏水按照上述操作作为空白参比，于640 种，其中包括能量饲料、蛋白质饲料和粗饲料，分 nm波长下比色，测定各试管溶液的吸光度．以吸光 别用高氯酸水解一葸酮比色法和国标中的酶水解法 度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线， 分析测定其淀粉含量，对两种测定结果进行比较研 进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之间的回归 万方数据 第3期 郭冬生，彭小兰 慈酮比色法和酶水解法两种淀粉测定方法的比较研究 35 公式． ％氢氧化钠；碱性酒石酸铜甲液 称取34．639g硫酸 mL硫酸， 操作步骤：称取2．5g饲料样品于50mL离心 铜 CuS04．5H