蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量实验报告.pdfVIP

实验4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 化工专业实验报告 第一部分：实验预习 实验名称 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 一、实验预习 1. 实验目的 1.1 培养安全意识，注意安全； 1.2 掌握用三氯乙酸（TCA ）抽提法提取酵母菌中海藻糖的方法； 1.3 掌握用蒽酮比色法测定海藻糖含量的原理和方法。 2. 实验原理 2.1 酵母菌中海藻糖→TCAaq 2.2 海藻糖→葡萄糖→糖醛 2.3 糖醛+蒽酮→蓝绿色复合物→分光光度计测量 3. 试剂与仪器 1）化学试剂 2g/L 蒽酮试剂：称取0.10g 蒽酮溶于50ml80% （体积分数）H SO 中，0.1g/L 标准葡萄 2 4 糖溶液，5g/L 三氯乙酸水溶液（TCA ）。 2 ）测量仪器 沸水浴、冰水浴、53WB 分光光度计、离心机 4. 实验步骤 准备试剂与仪器 ↓ 称量30mg 干酵母 ↓ 加入3mlTCAaq ↓ 离心，取上清液稀释40 倍 ↓ 配制蒽酮溶液 ↓ 1 实验4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 取5 支编号试管，加如下溶液 ↓ 表一、溶液配制组成 编号 1 2 3 4 5 葡萄糖/ml 0 0.3 0.6 0.9 未知样1ml 蒸馏水/ml 2 1.7 1.4 1.1 1 蒽酮/ml 8 8 8 8 8 总计/ml 10 10 10 10 10 ↓ 立即放入冷水中，冷却后拿出混匀，在放入冷水中 ↓ 打开试管盖，擦净外壁与试管盖的液体 ↓ 沸水浴6min，观察现象 ↓ 放入自来水中冷却 ↓ 测量吸光度，处理数据 ↓ 整理好实验台 5. 注意事项 注意实验的人身安全与仪器安全 称量药品一定要准确 加入蒽酮操作上需要尽快操作，但要确保安全 注意离心机与分光光度计的使用 6. 要采集的数据 温度，压力，湿度（有则记录），糖浓度，吸光度 7. 原始记录表 温度： 压力： 湿度： 2 实验4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 表二、原始实验数据记录 糖浓度/mL 0 0.3 0.6 0.9 Unknown 吸光度 平均值 8. 教师审阅意见： 3 实验4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 第二部分：实验报告 二、实验记录 实验现象： 沸水浴加热中溶液由黄色变为绿色，浓度不同则颜色深度不同。 整理后的数据如下： 表三、实验数据整理 糖浓度/mL 0 0.3 0.6 0.9 Unknown 吸光度 0 0.139 1.760 0.319 0.447 三、实验结果及讨论 1.海藻糖含量的计算 舍去偏差较大的第三个数据点，作图如下： A 度 吸光度-糖含量标准曲线 光 吸 0.35 0.3 y 0.3653 x R2 0.9812 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 糖含量ml 图1. 吸光度-糖含量标准曲线 在拟合直线时选择了固定截距为0 。 2 标准曲线方程为y 0.3653x ，相关系数R 0.9812 。 由标准曲线得到0.447 吸光度对应的糖含量为1.22ml。 则酵母菌中海藻糖含量为 1.22 ×0.95 ×40 ×3 ω ×100% 46.36% 30 2.实验结果与讨论 第三个实验点出现了较大的偏差，分析可能的原因是试管内还有杂质，导致显色反应程 度加剧。 4 实验4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量 3.思考题： 1）加蒽酮试剂时为什么盛有样品的试管必须浸入冰水中冷却？ 保证安全，防止过早进行反应。 2 ）煮沸样品时为什么“准确”煮沸10min？ 由于蒽酮试剂与糖的显色强度随时间变化，所以要准确控制时间，本实验中6min 即可。 3 ）在沸水浴中加热样品，为什么要打开试管盖？ 使得试管内外气压相等，沸水浴的温度即为其恒压沸点的温度。 4 ）使用离心机要注意哪几个问题？ 两侧必须配平，注意安全。 5 ）53WB 分光光度计的原理及操作注意事项是什么？ 原理： 分光光度计测量的是分子内电子跃迁产生的带状吸收光谱。根据不同的特征峰可以进行 定性测量，根据朗伯比尔定律可以进行定量测量。 注意事项： 溶液必须为均匀溶液，拿放石英皿要轻拿轻放，注意透光侧的光洁。 四、自评 这次实验在张老师的带领下收获颇多。首先在实验中老师反复强调了安全的重要性，这 让我加强了自己的安全意识。在实验流程的书写、数据处理的规范上老师也让我了解了正确 的做法，这些均对于我以后的科研生活有着很大的帮助，希望能够在以后的实验中越做越好。 五、参考文献 [1]王保国，化工过程综合实验（第2 版），清华大学出版社，北京，2009 年10 月。 六、指导教师批阅意见 表四、实验报告评分表 实验预习 实验记录 结果及讨论 自评 总