SOP-ZL-QC115计数培养基适用性检查操作规程.doc

文件内容： 1. 目的：………………………………………………………………………………………2 2. 适用范围：…………………………………………………………………………………2 3. 职责：………………………………………………………………………………………2 4. 程序：………………………………………………………………………………………2 5．变更历史：…………………………………………………………………………………5 颁发部门：质量管理部 分发部门： 质量检验部、质量管理部 起草人 审核人 QA审核人 批准人 部门 质量检验部 质量检验部 质量管理部 姓名 张建平 谭静 吴元碧 向红 签名 日期 1目的：建立计数培养基适用性检查的操作规程，以保证微生物限度检查结果准确性。 2适用范围：微生物计数的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基的适用性检查。 3职责： 3.1质量检验部微生物检验人员对本规程起草、执行负责。 3.2质量检验部经理对本规程审核，培训负责。 4程序 4.1概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是判断的重要影响因素。 4.2试验用菌株金黄色葡萄球菌［CMCC B 26003］ 枯草芽孢杆菌［CMCC B 63501］ 白色念珠菌［CMCC F 98001］ 黑曲霉［CMCC F 98003］ 试验用培养基 营养肉汤培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 4.4试验用稀释剂 0.9%无菌氯化钠溶液 含0.05%（ml/ml 聚山梨酯80的 0.9%氯化钠溶液试验用仪器设备 恒温培养箱30～35℃、霉菌培养箱20～2℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱 4.6操作步骤： 4.6.1菌悬液的制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h，取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml 0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释50～100cfu的菌悬液备用。 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h，取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释50～100cfu的菌悬液备用。 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml 聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml 聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。 菌液的计数（每种菌液制备2个平皿） 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml接种至营养琼脂培养基上，30～35℃培养48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接种至琼脂培养基上，23～28℃培养72h 4.6.3适用性检查 ～100cfu30～35℃培养48h～100cfu～℃倒置培养h，计数； 4.6.3.3.2被检培养基同法操作。 4.6.3.4酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查 4.6.3.4.1 取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu～℃倒置培养h，计数； 4.6.3.4.2被检培养基同法操作。 4.7结果判断 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。 4.8附件 4.8.1计数培养基适用性检查记录/报告书SOP-ZL-QC115-R1 5变更历史： 文件编号 版本号 生效日期 变更原因、依据及变更内容 SOP-ZL-QC115 00 2014.04.01 新程序 编号： 培养基名称 规格 批号 生产单位 配制批号 培养基 被检品 对照品 检验日期 检验 报告日期 年 月 日 复核 检验依据 《中国药典》201年版 1主要仪器设备 恒温培养箱 霉菌培养箱 2菌液的制备 取备用菌种的新鲜培养物接种至相应的培养基中依法培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液［黑曲霉菌的培养物用含0.05%（ml/ml 聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液］，按10倍递增稀释制成含菌数50～100cfu/ml的菌悬液。 试验用菌种 菌种 传代至 菌种接种至 稀释用溶液 稀释级 计数cfu/ml 第 代 营养肉汤培养基 0.9%无菌氯化钠溶液 金黄色葡萄球菌［CMCC B 26003］ 第 代 营养