生理学实验4红细胞渗透脆性的测定.pptVIP

实验四红细胞渗透脆性的测定 【实验目的】 1、本实验学习测定红细胞渗透脆性的方法。 2、加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正常形态与功能重要性方面的理解。 【实验原理】 在临床或生理实验使用的各种溶液中，与血浆渗透压相等的称为等渗溶液（如0.85%NaCI溶液），高于或低于血浆渗透压的则相应地称为高渗或低渗溶液。将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCI溶液中即可看到：在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血，这时血红蛋白逸出细胞外，称为溶血。 【实验原理】 将红细胞悬浮于等渗NaCl液中，其形态不变。若置于低渗NaCl溶液中则发生膨胀破裂，此现象称为红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定抵抗力，其大小可用NaCl溶液浓度的高低来表示。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中，开始出现溶血现象的NaCl溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力。出现完全溶血现象时的NaCl溶液浓度为该红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大脆性(最小抵抗力)，后者代表红细胞最小脆性(最大抵抗力)。 不同物质的等渗溶液不一定都能使红细胞的体积和形态保持正常，能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形状的盐溶液，称为等张溶液。所谓“张力”实际是指溶液中不能透过细胞膜的颗粒所造成的渗透压。例如NaCI不能自由透过细胞膜，所以0.85%NaCI既是等渗溶液，也是等张溶液；但如尿素，因为它可以自由通过细胞膜，使胞外成为低渗溶液从而发生溶血。1.9%尿素溶液虽然与血浆等渗，但红细胞置入其中后立即溶血，所以不是等张溶液。 【实验材料】 实验动物： 动物种类不限 。 实验器材：试管架、小试管、滴管，移液管 。 药品与试剂：1%NaCl溶液、0.85%氯化钠溶液、蒸馏水，1.9%尿素溶液，1%肝素。 【实验方法】 1．配制不同浓度的低渗NaCl溶液：取口径相同的干燥洁净小试管10支，分别编号排列在试管架上，配制出10种不同浓度的NaCl低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。每个试管总量均为2.5ml或4ml，视试管大小而定。 另取3支小试管，在三支试管上分别编号11-13，分别加入0.85%NaCl溶液、1.9%尿素和蒸溜水2.5ml或4ml，与前面10支试管量一致。 2．制备抗凝血：不同动物采血方法各异，但多采用末梢血。把血液放入含有肝素的烧杯内，混匀。1%肝素1ml可抗10ml血。 3. 加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，依次向13支试管内各加1滴，轻轻颠倒混均，切忌用力振荡。先观察11、12、13管的变化，其他10支试管在室温下放置1小时。 4．观察结果 血液溶血情况，其现象可分为以下几种： (1) 试管内液体完全变成透明红色，说明红细胞完全破裂，称为完全溶血。 (2) 试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，表示部分红细胞没有破坏，称为不完全深血。 (3) 试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，说明红细胞完全没有破坏。 4．观察项目 (1) 观察不同浓度低渗NaCl?混合液的颜色和透明度。 (2) 比较第11、12、13管的溶血情况并分析其原因。 【实验结果】 【注意事项】 1．每支试管内血液滴入量应准确无误(只加一滴)。 2．确保每支试管NaCl溶液的浓度准确、容量相等。 3．试管必须清洁、干燥。 4．混匀时，轻轻颠倒1-2次，减少机械振动，避免人为溶血 5. 观察结果时应以白色为背景。 * * * * * 红细胞溶血后留下一个双凹圆碟形空壳，就是血影。血影是细胞膜上的一个由多种蛋白(血影蛋白，锚蛋白，带状蛋白等。)组成的骨架系统 。