《人体生理学实验》牛蛙.docVIP

人体生理学实验 实验目的： 1：学习蛙类动物双毁髓的实验方法； 2：掌握生理学实验手术常用器械的使用和基本操作方法； 3：学习制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本的操作； 实验原理： 1：生理学实验中常利用蛙的坐骨神经—腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、 兴奋性、刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征； 2：蛙的离体组织、器官保持活性所需的条件比较简单，易于控制盒掌握； 3：任氏液是比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长蛙心脏在体外 跳动时间，保持其它离体组织器官生理活性等； 实验设备及材料： 对 象：牛蛙 设 备：常用手术器械（手术剪、手术镊、眼科镊、毁髓针、玻璃分针）、 玻璃板、锌铜弓、培养皿、滴管、任氏液、粗剪刀、蛙板、蛙 钉、粗棉线 药品与试剂：任氏液 四、实验方法： 制备离体蛙心 (1)取一只蛙，捣毁脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。从剑突下将腹部 皮肤向上剪开，然后剪开胸骨，打开心包，暴露心脏，分离左、右主 动脉。 (2)在左主动脉下方穿一根线，此头端结扎作插管时牵引用，在主动脉干 下方穿一根线，在动脉圆锥上系以松结用于结扎固定蛙心管。 (3)左手持左主动脉上方的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部剪 一小口，右手将盛有少许任氏液的大小适宜的蛙心管由此切口处插入 动脉圆锥。插管头到达动脉圆锥时，用镊子夹住动脉圆锥少许，将插 管拔出后退，并转向心室中 方向， 镊子向插管的平行方向提拉， 心室收缩期时将插管插入心室。蛙心插管进入心室后管内任氏液的 液面会随心室的收缩而上下波动。蛙心插管进入心室后，用预先准备 好的松结扎紧，扎线系在蛙心插管的侧钩上打结并固定。剪断主动脉 左右分支。 注意：勿扎住静窦脉，插管不可插入过深，以免心室壁堵住下口。 （画心室图，见26页） (4)轻轻提起蛙心插管以略高心脏 ，用一线在动脉干与腔 脉交界处作一结扎，结扎线应尽量下压，以防伤及动脉干，在结扎处外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来。 (5)用新制任氏液反复换洗蛙心插管内有血的任氏液，直至蛙心插管内无 血液残留为止。此时离体蛙心插管制备成功，可供实验。 (6)将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将 蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变梁上，调节此线张力至 1g，插管内加灌流液约1—1.5m,并在插管上标记灌流液的高度。在 此实验以后过程中，灌流液稳定于该高度。 2：制作坐骨神经腓肠肌标本： 剥制后肢标本： 法一：将双毁髓的牛蛙背面向上放入蜡盘中。左手持手术镊轻轻提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后缘水平的脊柱。用手术剪横向剪断脊柱。左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤，同时弃其头部及内脏。将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。清洗手及手术器械上的污物。 法二：将双毁髓的蛙腹面向上放入蜡盘，左手持手术镊轻轻提起腹壁皮肤 ，右手持手术剪将皮肤剪开，再见开腹壁肌肉。然后用手术镊轻轻提起内脏，自基部剪开（勿伤脊神经）。左手轻轻托起蛙后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方剪断脊柱。 注意：操作过程中不可将剥皮的标本同皮肤、内脏等弃物放在一起。 分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧。 用左手拇指及食指压住标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀于耻骨联 合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手术剪剪开两后肢相连的 肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），使两后肢完全分离。 也可不用手术刀切开耻骨联合，而用左手托起标本，右手持手术剪直 接剪开耻骨联合。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任 氏液中备用。 注意：操作要十分小心，切勿切断坐骨神经。 （3）分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底朝上，用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板上。用玻璃解剖针