端粒酶逆转录酶表达与肝细胞癌临床病理特征的关系.pdfVIP

端粒酶逆转录酶表达与肝细胞癌临床 病理特征的关系 李松岗1刘伟中1张伟1梁超1 [摘要]目的 探讨hTERTGE表达在肝癌发生、发展进程中作用以及可能的临床诊断价 值。方法 采用RT-PCR检测hTERT在32例肝细胞癌组织和相应癌旁组织的表达情况。 结果 1、32例肝癌中，hTERT表达阳性的有27例(84.38％)；阴性表达有5例(15.62％)， 癌旁组织中仅有三例表达阳性(9.38％)，二者比较有统计意义(P＜0.05)。2、肝细胞癌组织 hTERT表达与肿瘤大小有显著关系(P=0.015)，而与肿癌其他临床病理指标之间无显著关 系；2、hTERT表达阳性肿瘤多大于5cm；相关分析表明hTERT阳性表达与肿瘤大小正相关 (P=0.004)。结论 1、hTERT表达存在明显组织特异性，可以作为IICC诊断的一个特异性 指标。2、hTERT表达阳性肿瘤多为大于5cm的肿瘤，可能预示着hTERT表达肿瘤侵袭性较 强，预后较差，是肝细胞癌评估手术疗效的有效指标之一。 [关键词] 肝细胞癌;hTERT;临床病理 瘤组织和相应的癌旁组织，均经过病理学检查证实为肝细胞癌；标本取下用预冷的生理盐水 冲洗后，立即置人液氮罐中，后转入一80℃冰箱保存；同时收集患者相关临床病理资料，本组 诊断为肝细胞癌组中27例为男性，5例为女性；年龄29—73岁，平均49．16岁。病理分级根 会全国肝癌专业委员会1999年提出的肝癌分期标准¨1进行临床分期。 二、实验方法： (一)、组织RNA提取： l、组织取材：新鲜手术切除标本，取肿瘤中心无坏死、液化组织和距癌边缘3cm无癌的相对 正常组织为对照。组织离体后用冰盐水冲洗(以去除血迹)后，用剪刀分成若干小块，其中一 块做组织切片，用于HE染色；由两位有经验的病理学家阅片进行病理诊断；其余组织放放 标本液氮罐中，移入一80℃深低温冰箱保存。 置于150℃高温下烘烤6小时。 3、组织细胞总RNA提取(’mlzol一步法)： RNA样本纯度较高，没有蛋白残余。 (二)逆转录合成cDNA：加样，振荡混匀后，低速离心10秒钟；循环参数：70℃5分钟一 钟：反应结束后，立即放于冰上，冷却后一20℃冰箱保存备用。 (三)PcR扩增： 1、引物设计：实验所用引物G1ERT、GAPDH均为自行设计，符合引物设计原则；通过核 对全长序列，进行Bl鹊t来源分析，证实正确；引物序列、特征见表l。反应体系中上、下游引 物终浓度均为10pmol／L。 阴性对照，以MDS细胞株所提。CDNA为阳性参照，以排除因非特异扩增出现的干扰。 3、电泳、数字成像：扩增完成后，上样，室瘟、恒100伏电压泳，待溴蓝指示条带跑过凝 胶全长一半多后，关闭电源。凝胶置于紫外灯下，观察结果，并用Islooo凝胶数字成像系统 拍照、保存。所有阳性和阴性结果均经过二次扩增检验证实。 三、统计学分析： c黼ct 结果采用四格表确切概率法(Fish’stcst)分析：相关分析采用spc姗舳等级相关 分析；采用sPsSll．O统计软件包进行统计分析；P固．05为有统计学意义。 结 果 本实验共收集32例肝癌及其相邻正常或硬化组织，分析临床病理资实，本级病例特点 是以中青年为主，大部会有乙肝和硬化背景：临床病理特征多是单个病灶，肝癌直径多大于 5cm，多无癌栓与转移。 32例肝细胞癌标本中hTERTmRNA检测表达阳性的共有27例，占总数的84．4％；阴性 余均为阴性；扩增产物经电泳，DNA分子标志标定，确认为目的条带。肿瘤与癌旁组织表达 的情况比较有显著差异(P羽．001)。在癌旁组织检出的三例阳性样本的表达强度明显要低 于相应肿瘤组织。 39 的年龄、HBs 肿瘤单或多发病灶无关；HTERT表达阴性组织中有4例为小于或等于5cm的肿瘤，l例为大 O．004)。结果见表2。 表2 HTERT表达与临床病理指标的关系 竺!翌兰． 竺兰二西主兰兰兰：竺 年龄 鬟3多 ．穹 ；