斑蝥酸钠维生素B6注射液对肿瘤患者外周血T淋巴细胞增殖和细胞因子表达的影响.pdf

中文摘要 斑蝥酸钠维生素B6注射液对肿瘤患者外周血T淋巴 细胞增殖和细胞因子表达的影响 摘 要 目的：根据中医辨证理论，癌症患者往往多种发病机制 并存，故治疗上也是多种治疗方法并用。目前的研究成果表 明，中药主要通过以下几个方面发挥临床功效：调节免疫功 能，抑制肿瘤新生曲L管的生成，诱导细胞分化，促进细胞凋 亡，直接杀伤肿瘤细胞，逆转肿瘤细胞的多药耐药，抗突变 作用，抗肿瘤细胞的转移。中药抗肿瘤是多方向、多途径发 挥作用的，在临床中应坚持辨证论治与辨病论治相结合。 斑蝥为芫菁科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥全 虫，现代药学研究表明其主要药用成分是斑蝥素。斑蝥酸钠 是斑蝥素经过氢氧化钠水解生成的，其与维生素B6组成的 复方制剂斑蝥酸钠维生素B6注射液在保留斑蝥素抗癌作用 的同时，其抗癌谱更广，毒副作用更小。斑蝥酸钠维生素B6 注射液治疗恶性肿瘤在临床上已得到广泛应用，过去的研究 表明其抗癌机制主要是细胞毒作用，对于其它作用机制的研 究，如通过调节免疫功能抗肿瘤的研究也只是局限于临床研 究。而对于其抑制肿瘤新生血管的生成、诱导细胞分化、促 进细胞凋亡、逆转肿瘤细胞的多药耐药、抗突变作用、抗肿 瘤细胞的转移等机制的研究尚未见相关报道。 本研究首次通过体外试验，应用MTT法、流式细胞术、 放射免疫、RT-PCR等多种方法，试图从细胞、分子和基因 水平研究斑蝥酸钠维生素B6注射液对T淋巴细胞增殖和分 中文摘要 钠维生素B6注射液的免疫调1，作用和抑制忡瘤新生血管生 成的作用，为斑蝥酸钠维生素B6注射液的进一步研发和临 床应用提供更加可靠的理论和实验依据。 方法：1外周血单个核细胞的分离：抽取恶性肿瘤患者 静脉血，采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞即淋巴 细胞。2 PHA)诱导的T淋巴细胞的增殖反应：将上述制备好的细胞 悬液加入96孔培养板，设空白对照组、PHA对照组和7个 不f司药物浓度的实验组，T淋巴细胞培养72小时后倒置显微 镜下观察形态学变化，用酶标仪测OD值。选两个促增殖作 用最明显的药物浓度组为实验组并设PHA对照组进行后续 试验。3流式细胞仪测定T淋巴细胞周期：细胞进行培养， 收集细胞，用流式细胞仪检测细胞周期。4放射免疫法测定 IL一4和IL．8的含量：实验组和对照组细胞进行培养后留取上 RT-PCR测定 清液，用IL一4和IL-8放免药盒检测其含量。5 T淋巴细胞内IL．2mRNA的含量：实验组和对照组细胞进行 培养，收集细胞，提取细胞总RNA。采用一步法进行反转录 和扩增。将RT-PCR产物用1．5％琼脂糖凝胶电泳后，应用凝 胶成像系统及凝胶分析软件对电泳条带进行成像分析，用 所有数据均用；s表示，用SPSSll．5统计软件进行处理，多 组问比较用方差分析，实验组与对照组间比较用SNK—q检 验，P0．05有统计学意义。 结果：1在PHA协同刺激下，细胞培养72小时后，倒 置显微镜观察各组细胞均呈现集落状生长，其中0．010ugJ7ml 中文摘要 较PHA对照组减少。MTI结果显示：斑蝥酸钠维生素B6 i毫射液在一--定范围内，能刺激外周血T淋巴细胞的增殖一且 随着药物浓度的增高促增殖作用增强。但当药物达到一定浓 度时，随着浓度的增高促增殖作用减弱，达到较高浓度时甚 至有杀伤T淋巴细胞的作用。其中促增殖作用最强的两个浓 素B6注射液可以促进T淋巴细胞的活化，促进细胞由Go／G1 期向s期转化。两个实验组的s期细胞百分率与对照组的S 期细胞百分率相比差异有统计学意义(P0．05)。3两个实 验组IL．8的分泌与对照组相比降低且有统计学意义(P IL．4 0．05)。两个实验组之间相比无统计学意义(P0．05)。4 的分泌显示出随药物浓度增高而增高的趋势，但无统计学意 促进T细胞内IL。2mRNA的表达，两个不同实验组与对照组 用较0．010ug／ml实验组弱，且两个不同实验组比较差异有统 计学意义(P0．05)。