第三章 植物器官培养2014创新.ppt

器官培养（Organ culture） 器官培养：植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养。 根段、根尖、 茎段、茎尖、 块茎、球茎、 叶片、子叶、 花序、花瓣、子房、花药、花托、 果实、 种子等。 （二）培养基 多为MS培养基及其改良配方， 还有：White配方、 B5配方、 Heller配方、 Gautheret配方等。 2.纸桥培养法 滤纸取代琼脂， 液体培养基。 优点 营养物质能均衡持久地供给外植体，利于外植体健康生长。 缺点 操作复杂。 （一）茎尖微繁技术的一般方法 1. 无菌培养体系的建立 外植体制备 正在生长的芽或腋芽、茎段、鳞茎切块、块茎、球茎。 茎尖组织大小为带2-4个叶原基或更多。 操作程序 类似一般无菌操作基本技术， 基本培养基：MS、B5、White等， 糖2-3%， 生长调节剂。 培养条件 1000-3000Lx、16hr、25℃。 3.生根成苗 胚状体可直接成苗， 腋芽和不定芽须转入生根培养基培养。 矿质元素高利于茎叶生长，低利于生根，故生根培养基中无机盐低。 芽苗生根采取的措施 （1）降低基本培养基无机盐浓度 一般采用1/2MS或改良White基本培养基。 （2）调节生长素浓度 采用IBA或NAA0.1-0.5mg/L有利于分化根。 （3）添加吸附剂 如活性碳。 （4）减少琼脂用量。 (二) 影响茎尖培养微繁殖的因素 基因型 外植体的大小 供试植株的生理状态 芽在植株上的部位 供试植株的年龄 培养基：植物生长物质 褐变 玻璃化 玻璃化苗的叶和嫩梢呈水晶透明或半透明水渍状； 整株矮化肿胀、失绿； 叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎； 叶表缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具栅栏组织，仅有海绵组织。 玻璃化苗中因其体内含水量高， 干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和酶活性降低， 组织畸形，器官功能不全， 分化能力降低，所以很难成活， 严重影响组培苗繁殖率的提高。 5.影响叶肉组织培养的因素 （1）基因型 不同植物种类、 同一物种的不同品种间在叶组织培养特性上有一定的差异。 （2）细胞分裂素与生长素的组合 两种细胞分裂素都能促进芽的分化， 6-BA的作用好于KT， 但6-BA对不定芽的进一步发育（茎叶的形成）有抑制作用。 细胞分裂素与生长素的组合 细胞分裂素与生长素配合使用， 诱导芽分化效果好于单独使用细胞分裂素。 可进行根系生长发育，营养代谢或结瘤试验。 Raggio1965年等设计了离体根的结瘤实验装置 此装置由2个部分组成， 下部是试管，管中装有含无机盐的营养液， 并接种根瘤菌； 上部是玻璃盖，盖中有一单向开口的管状凹槽， 槽中盛放含有有机化合物的琼脂固体培养基。 故有机营养从根基部吸收， 无机营养从根尖吸收。 Bunting和Horrocks修改了Raggio等的装置， 变为在粗沙中提供无机盐。 利用这一技术研究菜豆、大豆等离体根根瘤菌的固氮情况， 结果表明这些根瘤菌含有血红蛋白，并能固定大气中的氮。 二、花的培养 整朵花 或花器官（花托、花柄、花瓣、花丝、子房、花药、胚珠等） 利用花的培养 进行花性别决定研究是可行的， 特别是对黄瓜、南瓜等雌雄异花植物； 果实和种子发育； 花形态发生。 Galum(1959） 最早研究了生长素和赤霉素对黄瓜性别表现的作用。 培养结果：成熟果实；不定芽或丛生芽；愈伤组织。 三、幼果的培养 幼果培养 可以方便地进行果实内结构变化与营养、激素、外界条件等关系的研究， 以探究果实发育的机制。 Nitsch等（1951） 首先进行草莓等植物的幼果培养； 后来，Nicherson（1978）将越桔幼果培养成熟， 佐藤洋一等（1989）把葡萄的幼果培养成熟。 培养结果：成熟果实或愈伤组织。 一、根培养 （一）根培养的实践意义 1.进行根系生理代谢研究的最优良试验体系。 2.研究器官分化、形态建成的良好体系。 3.建立快速生长的根无性系，对药物生产有重要意义。 4.对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突变体，用于育种实践。 第四节 其他器官的培养 1.培养步骤 离体根培养的第一步是要获得无性繁殖系。 直接取室外植物的根