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* 1.磷酸二酯键（英语：）也称为“3‘,5’-磷酸二酯键”或“磷酸双酯键”，是核酸分子中的磷酸基团的磷原子与另外两个五碳糖分子的碳原子之间形成的共价键。这种形式的键结于DNA及RNA分子中负责将分别位于两个核糖上的3号碳与5号碳连结起来。 2. 酯是酸(羧酸或无机含氧酸)跟醇脱水生成的化合物。酯的一般通式为 硝酸乙酯,(C2H5O)2SO2硫酸乙酯。此外,还有碳酸酯和磷酸酯等 * 基因只切下来吗?还要如何处理?-----缝合 * * * 注意:解旋酶作用的是氢键.高温\重金属可使氢键断裂. * 注意连接酶名称的书写方式。 * * 3′末端的羟基上 * * 即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 * * 将切下来的基因往什么上缝合?是受体细胞吗?---不是,是运载体上, 运载体是什么物质?目的基因能望什么上缝?---DNA * * * * 太大就不便操作. * * 染色体外的DNA， 为何不能用核DNA？ * * 质粒只有拟核基因的1/100,一般它的存在于否对宿主细胞没有决定性.不会威胁宿主细胞的生存.,可以与宿主细胞长期共存. 美国科学家用显微注射法将含有大鼠生长素基因的质粒导入小鼠受精卵细胞,得到巨型鼠,已经成功. 天然的运载体往往不能满足人们的需求,所以常常需要认为对运载体进行改造. * * * * 二、基因的针线 ——DNA连接酶 （1）连接的部位： “梯子”断口的“扶手” ——磷酸二酯键； 非“梯子”中间的“踏板” ——氢键 （2）结 果： 将两个DNA相同的黏性末端或平末端连接起来 注意:氢键是分子间作用力,断裂与重新形成均与限制酶\连接酶无关. 连接.swf （3）.连接酶的类型（按来源分类） (1)E · coli DNA连接酶： (来源于大肠杆菌) 只能连接双链DNA片段互补的粘性末端 (2) T4 DNA连接酶： （来源于T4噬菌体） 既可以连接双链DNA片段 互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端 注意酶的 写法 相同点： 1、都连接双链DNA的缺口，不能连接单链DNA。 2、都形成磷酸二酯键； 不同点： （1）DNA聚合酶：只将单个核苷酸加到已有的核酸片段的 . DNA连接酶：在两个DNA片段之间. （2）DNA聚合酶：以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链； DNA连接酶：将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。 不需要模板。 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ 2）DNA连接酶的分类： E·coli DNA连接酶：大肠杆菌中分离得到，只能连接黏性末端 T4 DNA连接 酶：T4噬菌体中分离得到，可连接黏性末端 和平末端 “缝合”切割末端之间的缝隙，形成磷酸二酯键， 1） DNA连接酶的作用： 小结:二、基因的针线----DNA连接酶 思考1：运载体的作用有哪些？ 作用一：将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 作用二：在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 三、基因的“运输工具”——运载体 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 如何察觉目的基因是否进入受体细胞？ 你敢用霍乱弧菌作为载体吗？ 思考2：构建一个运载体你该考虑哪些问题？ 运载体是什么物质? 结论:运载体是DNA 因为：自然状态下的运载体不能完全满足人类需要。 为何要构建运载体？ 一].运载体DNA必须具备的条件 1）能在宿主细胞中复制.稳定地保存 2）必有一个或多个限制酶切点 3）具标记基因 (抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。) 必是安全的,对受体细胞无害 5) 大小应适合 便目的基因插入 便于鉴定和选择 便提取和体外操作 便于稳定的表达 二].常用的运载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒（最常用） 2）噬菌体的衍生物或某些动植物病毒 质粒：基因工程最常用的运载体。 质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中核基因以外的DNA分子，裸露、结构简单能自主复制，绝大多数细菌质粒都是闭合环状DNA分子。有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。 能复制并