必威体育精装版常用液相色谱柱使用与维护保养.ppt

②在反相条件下使用时，-NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱效会下降很快，所以故障率较高。若出现柱压增高柱效降低等情况，建议采用如下方法处理： 若流动相含有缓冲盐，先以流动相比例的水-有机溶剂，以检测分析时同流速冲洗约30倍柱体积→再用纯甲醇，以1.0ml/min流速冲洗约50倍柱体积→然后用异丙醇，以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积过渡→再用二氯甲烷以0.6ml/min流速冲洗色谱柱约10倍柱体积→再用异丙醇以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积过渡回到甲醇条件下，以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积，密封保存或用流动相平衡2h左右（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。若上述方法不凑效，可尝试如下程序冲洗与再生： 95％水-5％乙腈，以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→THF（四氢呋喃），以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积→95％乙腈-5％水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→保持95％乙腈-5％水，以低流速0.2-0.5mL/min冲洗过夜→流动相平衡2h（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。 3.2.2氰基柱（-CN） ①在正相条件下使用时，故障率较低，操作和维护与氨基柱基本完全相同。但当柱子使用一定时间后，若出现柱效下降，柱子老化，可通过冲洗再生来恢复其柱性能。具体方法如下： 用氯仿以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用异丙醇以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→然后用二氯甲烷以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用流动相（pH1.5-7.0为佳）平衡1h，待基线平稳，进样检测即可。 ②在反相条件下使用时，-CN键会水解，尤其是在pH1.5-7.0范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱效会下降很快，所以故障率较高。如果在这个条件下使用，一定要注意及时清洗。若出现柱效下降，柱子老化，可通过冲洗再生来恢复其柱性能。具体方法如下： 若流动相含有缓冲盐，先以流动相比例的水-有机溶剂，以检测时同流速冲洗约30倍柱体积→再用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用THF（四氢呋喃）以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用流动相平衡2h（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。若上述方法不凑效，可尝试如下程序冲洗与再生： 用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用 THF（四氢呋喃）以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→保持95%乙腈-5%水继续冲洗，以低流速0.2～0.5mL/min冲洗过夜→流动相平衡2h（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。 3.3阴/阳离子交换柱（negion/cation exchange column） 3.3.1阳离子交换柱常见故障与处理：离子交换柱属于较脆弱的色谱柱，阳离子交换柱在使用过程中，往往会由于不规范操作而导致一系列故障。常见故障如下： ①柱压升高伴随柱效降低：主要是由于系统管路或柱保存过程中柱内或长菌、样品溶液中的颗粒物积聚在烧结物或者柱床上等所致。 ②色谱峰额外地展宽：主要是由于管路太长、非新鲜配制的流 动相中含有不正确的阴离子、流动相pH与离子强度不正确、用流动相平衡时间不够等所致。 ③柱压正常伴随柱效降低：主要是由于样品中有脂肪，油脂，脂质等有机物致使固定相的表面被覆盖、从样品中带来的不确切的有机物或未正确制备洗脱液、在洗脱液制备完成以后带入洗脱液中的非特定有机物（eg.运输时从大气中带来）。 针对上述情况，在使用离子交换柱过程中需特别注意即可避免。若已经产生故障，可根据实际情况处理，尝试按如下方法再生： 首先反接色谱柱→用1mol/L的硝酸铵溶液，以0.4ml/min的流速洗脱30ml～60ml→再用甲醇-水（40：60），以0.4ml/min的流速洗脱30ml～60ml→然后用异丙醇，以0.4ml/min的流速洗脱30ml→再用去离子水，以0.4ml/min的流速洗脱30ml→然后用检测用洗脱液，以0.4ml/min的流速洗脱30ml→最后将柱子接回正常方向，用检测用