经典液相色谱法平面色谱分析要点.ppt

18.4.1 平面色谱法的分类 定义和分类 平面色谱法(plane chromatography)是在平面上进行分离的一种色谱方法，主要包括薄层色谱法、纸色谱法和薄层电泳法。 薄层色谱法： 将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法。 按分离原理又可分为： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻色谱法 纸色谱法： 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法。 20世纪40年代 产生 应用于生化医药学方面的微量分析。 20世纪60年代后， 应用减少。 薄层电泳法 带电荷的被分离物在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶及聚丙稀酰胺凝胶等惰性介质上，向与其相反的电极方向，以不同的速度迁移而实现分离。 薄层色谱法的特点： 分离能力强，斑点集中。 灵敏度高，几微克，甚至几十纳克的物质也能检出。 展开时间短，一般只需十至几十分钟。一次可以同时展开多个试样 试样预处理简单，对被分离物质性质没有限制。 点样量较大，可点成点或条状。 所用仪器简单，操作方便。 18.4.2 平面色谱法参数 定性参数 比移值 相对比移值Rr 相平衡参数 推导比移值与分配系数的关系 讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关。 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为。 分离参数 分离度 分离数 18.5 薄层色谱法 主要类型 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻色谱法 18.5.1 吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 吸附剂 最常用的是硅胶、氧化铝、聚酰胺、纤维素、葡聚糖、磷酸钙、磷酸镁、硅酸钙镁等。 硅胶： SiO2·H2O 结构： 内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→吸附活性中心→ 氢键作用 适用范围： 硅胶表面的pH约为5，适合分析酸性或中性物质。 硅胶的类型： 硅胶H： 不含黏合剂，铺成硬板需另加粘合剂。 硅胶G： 是硅胶和锻石膏混合而成。 硅胶GF254：含锻石膏和无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌(Zn2SiO4:Mn),在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 购买时注意： 规格（主要是种类、活度级别和粒度） 常规：10～40μm 高效：5μm或10μm 氧化铝 碱性氧化铝、 中性氧化铝、酸性氧化铝 使用时可不加黏合剂，也可加煅石膏或CMC等黏合剂； 通常使用活性级别Ⅱ～Ⅲ级。 展开剂 常见溶剂的极性由强到弱的顺序： 水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯三氯乙烷四氯化碳环己烷石油醚 如何选择吸附剂和展开剂？ 开展实验时，可以选用单一溶剂展开，再根据Rf的大小，进一步调整展开剂的种类或选用二元、三元展开剂。 分离酸性物质，可在展开剂中加入少量酸性溶剂，如甲酸、乙酸等 分离碱性物质，可在展开剂中加入少量碱性溶剂，如氨水、乙二胺等。 例如：用氯仿展开时，如果Rf值太小，则可加入极性___的展开剂，如_____。如果Rf值太大，可加入极性____的展开剂，如_______________。 18.5.2 薄层色谱操作方法 可分制板、点样、展开和显色四个步骤。 薄层板的制备 软板的制备 硬板的制备 硬板加了粘合剂，常用的粘合剂有羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和锻石膏(CaSO4·1/2H2O)两种。 硅胶-CMC板制备 取羧甲基纤维素钠5~7g,加1000ml水，加热使溶解，放置澄清，取上清液100ml,分次加入硅胶约33g,调成糊状。去除气泡后，将糊状的吸附剂倒在清洁的玻璃板上，使均匀涂布于整块玻璃板上，平放自然晾干，105℃活化1h，置干燥器中保存备用。 点样 a.样品溶液的制备 一般选用易挥发，与展开剂极性相似的有机溶剂，如甲醇、丙酮、乙醇等。配制样品液浓度为0.01% ~ 0.1%。 目的：使点样后溶剂能迅速挥发，减少色斑的扩散。 b.点样量和点样工具