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蛋白质的分离和纯化 一、蛋白质的分离 偏碱性溶液 透析液（中性缓冲液） 有机溶剂 二、常用的分离方法 2.薄膜透析法 （1）原理：利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将蛋白质与其他小分子化合物分离开。 （2）方法：将待分离的蛋白质溶液装入用半透膜制成的透析袋内，再将透析袋放入透析液中便可进行透析。 半透膜能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是 (　 ) A.透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性 B.采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来 C.离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离 D.蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动 三、血红蛋白的提取和分离 1.样品处理 2.粗分离 3.纯化 4.纯度鉴定 1.样品处理 （1）洗涤红细胞（低速短时离心，生理盐水） 目的：去除杂蛋白。 血样先低速短时离心分离红细胞，然后吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 低速离心：防止白细胞沉淀。 缓慢搅拌：防止红细胞破裂释放出血红蛋白。 柠檬酸钠：防止血液凝固。 （2）血红蛋白的释放 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。 甲苯：溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。 蒸馏水作用：使红细胞吸水胀破 1、洗涤红细胞的目的是 A.去除血清 B.去除杂蛋白 C.除去血小板 D.除去水 2、选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处 （ ） A.血红蛋白是有色蛋白 B.红细胞无细胞核 C.红细胞蛋白质含量高 D.红细胞DNA含量高 3、为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是 ( ) A.要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B.重复洗涤直到上清液呈红色为止 C.将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D.取血回来后，马上进行高速长时间离心 分离血红蛋白溶液 1、下列操作正确的是（ ） A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 2、在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是 （ ） A 洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐 B 洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果 C 洗涤过程选用0.1%的生理盐水 D 透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 3.纯化--凝胶色谱法 去除相对分子量大的杂质蛋白 1、在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因 ( ) A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次 序，降低分离效果 B、气泡阻碍蛋白质的运动 C、气泡与蛋白质发生化学反应 D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密 2、样品的加入和洗脱的操作不正确的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 4.纯度鉴定---SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳  1、下列关于DNA和血红蛋白的提取与分离属于的叙述中，错误的是 ( ) A.可用蒸馏水涨破细胞的方法从猪红细胞中提取到DNA和蛋白质 B.用不同浓度的NaCl溶液反复溶解于析出DNA可去除部分杂质 C.透析法分离蛋白质的依据是利用蛋白质不能通过半透膜的特性 D.进一步分离与纯化