蛋白质的生物合成与修饰精要.ppt

第五节 多肽链的折叠与加工 (自学) 一、末端的修饰 甲酰基、氨基末端的Met残基及其他额外氨基末端和羧基末端的一些残基可别切除。 二、信号序列的切除 三、氨基酸的修饰 1.磷酸化 2.羧基化 3.甲基化 四、糖侧链的连接 五、异戊二烯基团的附加 六、辅基的附加 七、蛋白酶水解修饰 八、二硫键的形成 嘌呤霉素： 九、抗生素对蛋白质合成的 抑制作用(自学) 四环素：阻断核糖体上的A位 环己酰亚胺：抑制80S 真核核糖体的肽基转 移酶 氯霉素：阻断肽基的转移 链霉素：低浓度→遗传密码错读 高浓度→抑制蛋白质合成起始 　　　　　 本章要求 翻译的概念 遗传密码的概念和特点 tRNA与氨基酸的活化 合成过程 2. E.coli16S和5SrRNA的二级结构平面图（基于链内碱基配对最大化原则） 3.核糖体上的结合位点 mRNA结合位点 tRNA结合位点 P位点、A位点和E位点 GTP水解位点 其他位点（多种蛋白合成因子和酶的结合位点） 二、tRNA具有特征性结构 1.简介： （1）73－93个核苷酸 （2）相对分子量24 000－31 000 （3）一种氨基酸对应于一种以上的tRNA 2.结构特征： (1)二级结构： 　　三叶草型 （2）X－射线衍射测定的tRNA三维结构： 倒L型 三、氨酰－tRNA合成酶和它们催化的反应 1.特点：氨酰-tRNA合成酶对每个氨基酸及相应的tRNA是专一的。 2.催化反应式： 氨基酸+tRNA+ATP 氨酰-tRNA +AMP+PPi Mg2+ 3.两类氨酰-tRNA合成酶 氨酰-tRNA的一般结构 四、一些氨酰－tRNA合成酶具有校对功能 1.校对功能的发现： 用Ile的相似物Val来检测Ile-tRNA合成酶对两种底物的作用。结果显示， Ile-tRNA合成酶对Ile的结合优先于对Val的结合200倍。自然中Val插入Ile位点的发生率是1/3000，这种精确度就是由Ile-tRNA合成酶保证的。 2.氨酰－tRNA合成酶对tRNA氨酰化校对功能： 五、氨酰-tRNA合成酶对tRNA的识别 1.“第二遗传密码”： 　氨酰-tRNA合成酶与tRNA的相互作用。 2.实验证明tRNA的氨基酸臂、反密码子臂以至于整个tRNA空间构象对氨酰-tRNA合成酶的识别都是非常重要的。 3.个别tRNA的反密码子直接影响氨酰-tRNA合成酶对其的识别。 4.Ala-tRNA合成酶对tRNAAla的识别基本上取决于tRNAAla氨基酸臂上的G=U。 六、多肽链的合成从氨基末端开始 1961年，Howard Dintzis 用Leu同位素跟踪法发现多肽链的合成从N-端开始。 七、一个特定氨基酸起始蛋白质的合成 细胞内起始密码子和多肽内部Met密码子的区别机制 1.原核生物： 2.真核生物： 以Met作为起始氨基酸，利用两个不同的tRNAMet来区分起始密码子AUG和内部密码子AUG 1.起始过程： 八、多肽合成起始的三个步骤 IF-3 IF-1 A U G 5 3 IF-2 GTP IF-2 -GTP GDP Pi 2.SD序列的存在与作用 3.fMet- tRNAfMet的正确结合 P位点的起始密码子与反密码子的相互作用 SD序列与16SrRNA的相互作用 P位点与fMet- tRNAfMet的结合作用 以上三点保证了fMet- tRNAfMet对核糖体P位点的正确结合 （一）进位（注册，registration） 根据密码子指导，相应氨基酰-tRNA进入核糖体A位。 九、延长阶段中肽键的形成 EF-T催化进位 （原核生物） Tu Ts GTP GDP A U G 5 3 Tu Ts GTP （二）成肽 由一种23SrRNA的核酶（旧称转肽酶）催化肽键形成。 （三）转位 EF-G有转位酶( translocase )活性，可结合并水解1分子GTP，促进核糖体向mRNA的3侧移动 。 fMet A U G 5 3 fMet Tu GTP 十、核糖体的校对功能 1.核糖体仅校对密码子与反密码子的相互作 用，