蛋白质分离纯化和表征精要.ppt

七、蛋白质性质小结 1、蛋白质的分子量 2、蛋白质的两性电离及等电点 3、蛋白质的胶体性质 4、蛋白质的沉淀反应 5、蛋白质的变性 6、蛋白质的颜色反应(补充） 蛋白质的变性 天然蛋白质分子受到某些物理因素如：热、紫外线、高压和表面张力或化学因素的作用时，生物活性丧失，溶解度降低，不对称性增高以及其他的物理化学因素发生改变，这种过程称为变性作用。 蛋白质变性过程中，往往出现以下现象： （1）生物活性丧失； （2）一些侧链基团暴露； （3）物理化学性质改变； （4）生物化学性质发生改变，分子结构伸展疏松，易为蛋白水解酶分解。 1、双缩脲反应 2、米伦氏反应 3、乙醛酸反应 4、坂口反应 5、酚试剂（福林试剂）反应 蛋白质的颜色反应 双缩脲反应 双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物。将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。 双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络和物，此反应称双缩脲反应。 米伦试剂反应 米伦试剂为硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸和亚硝酸的混合液，蛋白质溶液加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色。酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基，故酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白质都有此反应。 Tyr + 米伦试剂 红色 （硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸、亚硝酸 ) 乙醛酸反应 在蛋白质溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，凡含有吲哚基的化合物都有这一反应。色氨酸有此反应 Trp + 乙醛酸 + 浓H2SO4 紫环 坂口反应 精氨酸分子中含有胍基，能与次氯酸钠及α- 萘酚在氢氧化钠溶液中产生红色产物。 Arg + 次氯酸钠 + а-萘酚 红色 Folin-酚法（Lowry法） 酚试剂（福林试剂）反应 蛋白质分子一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将福林试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物。 Tyr + 酚试剂 蓝色 （磷钼酸、磷钨酸） * * * 第二单元 蛋白质化学 第3章 氨基酸 4 第4章 蛋白质的共价结构 2 第5章 蛋白质的三维结构 2 第6章 蛋白质分子结构与功能的关系 2 第7章 蛋白质分离、纯化和表征 4 第7章 蛋白质的分离、纯化和表征 p290 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 七、蛋白质性质小结（补充） 一、蛋白质的酸碱性质 蛋白质分子由氨基酸组成，在蛋白质分子中保存着游离的α-氨基和α-羧基及侧链上的各种功能团，所以其物理化学性质有些与氨基酸相同。 蛋白质也是一类两性电解质，能和酸或碱发生作用。在蛋白质分子中，可解离基团主要来自侧链上的功能团，这些基团能解离为带电基团，从而使蛋白质带电荷。 在酸性情况下，蛋白质中的各碱性基团接受质子，使蛋白质带正电荷； 在碱性情况下，蛋白质中的各酸性基团解离出质子，使蛋白质带负电荷。 在某一pH值时，白质所带的正电荷与负电荷恰好相等，即净电荷为零，此时溶液的pH值就是蛋白质的等电点。 每种蛋白质都有它特有的等电点，这也是鉴别蛋白质的指标之一。 等电点和蛋白质分子中所含氨基酸的种类有关 中性 碱性 酸性。 蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量 与等电点的关系 蛋白质 酸性氨基酸 每摩尔残基数 碱性氨基酸 每摩尔残基数 碱性/酸性 等电点 37 胃蛋白酶 6 0.2 1.0 血清蛋白 血红蛋白 核糖核酸酶 82 99 1.2 4.7 53 88 1.7 6.7 7 20 2.9 9.5 二、蛋白质分子的大小与形状 (一) 根据化学组成测定最低相对分子质量 (二) 渗透压法测定相对分子质量 （三) 蛋白质的扩散和扩散系数 (四) 沉降分析法测定相对分子质量 (五) 凝胶过滤法测定相对分子质量