血清酶类测定精要.ppt

三、血清酶的生理变异 1.性别 少数酶如CK、ALP及GGT等有性别差异，与血清酶的 来源组织有关。 2.年龄 血清酶的活性随年龄而变化，ALP和GGT到老年时可有 轻度升高。年龄差异也见于同工酶。 3.进食 过量饮酒可使血清GGT明显升高。 4.运动 多种血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT 等，其升高的幅度与运动量、持续时间、运动频率及 骨骼肌所含的酶量有关。 5.妊娠 胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、 LD、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶活性升 高。 6.其他 一些酶活性与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变 化及家庭因素有关。 标本（血清或血浆） 临床酶学测定酶之前，标本还要经过采集、分离和储存等一系列处理过程。而酶在血中处于一个动态变化过程，血液离开机体后还会有一定变化。因此在其中任何一个阶段处理不当，都有可能引起测定值的变化。 及时测定，如不能及时测定，应放入冰箱保存（但有些标本不能冷冻） ACP的测定底物、原理和方法与ALP 相似，只是反应pH为 酸性。如利用磷酸苯二钠法和磷酸对硝基酚法等在酸性条件下 测定ACP。国外多推荐使用磷酸麝香草酚为底物的比色法。 由于ACP不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定ACP（特别是PAP）。 因红细胞及血小板富含ACP，标本不能溶血且血标本采取后必须尽快分离血清（血浆）并立即测定。不同方法参考范围也不同。 [临床意义] 血清MAO活性测定是检查肝纤维化病变的重要指标 血清MAO-Ⅰ活性升高主要见于肝硬化和肢端肥大症（器官纤维化患者血清MAO活性升高与结缔组织代谢亢进有关）； 血清MAO-Ⅱ升高则主要见于大面积肝坏死（爆发性肝炎患者血清MAO活性升高与MAO从坏死的肝细胞线粒体上脱落有关） 血清乳酸脱氢酶（LDH）活性测定 乳酸脱氢酶(LD或LDH)催化乳酸氧化成丙酮酸，同时将氢转移给辅酶NAD+而成为NADH。 L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ LD是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于人体各组织中，以肝、心肌、肾、肌肉、红细胞含量较多。组织中LDH活力约比血清高1000倍，红细胞内LDH活力较血清约高100倍（溶血可引起LDH明显升高）。LDH有5种同工酶。 pH8.8～9.8 pH7.4～7.8 [测定方法] 目前根据LDH催化反应方向的不同，有两大类测LD方法： 以丙酮酸为底物（反应方向P?L）的逆向反应(称LD-P法) 以乳酸为底物（反应方向L?P）的顺向反应(称LD-L法) 我国多采用目前IFCC参考方法LD-L法，用连续监测法进行测定。 一、乳酸为底物的速率法（LD-L法） 原理 方法评价 ①乳酸盐和NAD+底物液的稳定性比丙酮酸盐和NADH 底物液的稳定性大，试剂若冰冻保存，前者可稳定6 个月以上，而后者只能保存数天； ②保持线性速率反应的时间范围较宽 ③重复性比LD －P 法好。 LD-L法与LD-P法相比的主要优点： 注意事项 由于逆向反应速度比正向反应速度快，所以测定方法不同，正常值也有差别，LD－P 法的参考值约二倍于LD－L 法。 不同的LDH同工酶对冷的敏感性有差异。LDH4和LDH5对冷特别不稳定。在低温(特别是20℃冰冻)可引起不可逆性失活，反而不如室温稳定（“冷变性”）。故血清标本应存放在室温中，室温存放2 ～3 天将不出现活性的丧失。如果血清标本必须存放较长时间，应加入NAD 或谷胱甘肽后保存于4 ℃ 环境中以降低LDH4和LDH5的失活速率。 标本采集：用血清或肝素抗凝血浆测定LDH活性的效果令人满意，草酸盐抗凝剂对LDH活性有抑制作用。标本应严格避免溶血。 乳酸脱氢酶在有辅酶I(NAD+)存在的情况下，催化乳酸脱氢生成丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕红色。其颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，同样处理丙酮酸标准液进行比色，即可求得LDH的活力单位。反应式如下： 二、比色法 原理 LDH 乳酸 + NAD+ 　 　 丙酮酸 + NADH + H+ 丙酮酸 + 2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-二硝基苯腙 + H2O NaOH 活性单位 100ml血清在37℃，与底物作用15min，产生lμmol丙酮酸为1个金氏单位。 [参考区间] 乳酸为底物的速率法： 109～245 U／L 比色法：190～437金氏单位 [临床