血涂片的制作和血细胞的观察计数血型鉴定精要.ppt

实验六 血涂片的制作和 血细胞的观察、 计数、血型鉴定 实验目的 掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点 掌握人体微量采血和用血细胞计数板进行细胞直接镜检计数的方法 掌握ABO血型的鉴定方法 材料和用品 材料 人血或兔血 主要用品 生物显微镜,采血针,双凹载玻片,血细胞计数板 红细胞稀释液（氯化钠、硫酸钠、氯化高汞） 白细胞稀释液（冰醋酸、龙胆紫） 标准A、B血清 瑞氏（Wright）染液 实验内容与方法 （一）ABO血型鉴定 1．实验原理 红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；ABO血型就是根据红细胞表面抗原来确定的，根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。 血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。 凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，进而引起红细胞破裂，产生溶血。 ABO血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血液分别与已知含A抗体和B抗体的标准血清混合，观察是否发生凝集现象，判断待测血液红细胞上有何种抗原，由此确定待测血液的血型。 ABO血型分类 ABO血型正反定型结果 （一）ABO血型鉴定 2．血型鉴定方法 标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。 分别吸取标准A血清和标准B血清各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。 采血针刺破左手无名指尖，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取血液，分别加入到玻片左、右两侧的血清内，并用牙签搅拌，使标准血清与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！） 手持玻片转动数次，转动时玻片应保持在一个水平面上，然后置室温下5min后观察结果。 肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。 进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。 （二）血涂片的制作和血细胞的观察 1．血涂片的制作 用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血针刺破指尖，从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴） 以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片 涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆盖 染1分钟后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5~8分钟此时涂片表面呈现一层古铜色 用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干 （二）血涂片的制作和血细胞的观察 2．血细胞观察 制作良好的血涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉红色。选一厚薄适宜部位置显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，了解涂片染色、细胞分布情况，再用油镜观察 (1) 红细胞 数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈 红色的圆盘状，边缘厚，着色较深，中 央薄，着色较浅，无细胞核、细胞器， 胞质内充满血红蛋白。 (2) 白细胞 白细胞数量较红细胞数量少，但胞体 大，细胞核明显，极易与红细胞区别开。 嗜中性粒细胞 是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般分3—5叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。 嗜酸性粒细胞 比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆形的颗粒，色鲜红或桔红。 嗜碱性粒细胞 数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上不易找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清。 淋巴细胞 数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。 单核细胞 数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细胞浅。 血小板 为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，中央有