牛海绵状脑病精要.ppt

24牛海绵状脑病 (Bovine Spongiforn Encephalopathy, BSE) 1、前言 牛海绵状脑病(Bovine Spongiforn Encephalopathy, BSE)俗称疯牛病, 它是一种类似脑病毒感染的传染病, 以潜伏期长,病情逐渐加重, 终归死亡为特征, 本病死亡率很高。首先发现的人类朊病毒疾病是库鲁病, 在动物中最早发现的是羊瘙痒病。 1985 年4月发现, 1986 年11 月将该病定名为BSE。 动物及人的各种朊病毒病: 由于此病迄今尚无法治疗, 又有传染给人之可能性, 使人得一种病死率极高的中枢神经退化病———新型克雅病(New V arientCreutzfeldt-Jakob disease, NV -CJD ), 因此, 疯牛病不仅对经济造成严重损失, 而且引起了全球对疯牛病的恐慌。 2、病原学 朊病毒( Prion, 有人译为朊粒或朊蛋白) 是一种特殊传染因子, 它不同于一般病毒, 也不同于类病毒, 它没有核酸, 而是一种特殊的糖蛋白。用PrP 代表( Pr 代表Prion, P 代表Protein) 。 PrP prpc与prpsc的对比: 生物学特性: 朊病毒是一种有两种结构型, 一种是prpc, 正常情况下存在于细胞表面, 无感染性, 可被蛋白酶K消化降解, 可溶于去垢剂。当蛋白结构由α螺旋变构成β片层结构时, 具有了致病性, 称prpsc, 而不被蛋白酶分解, 不溶于去垢剂。 为什么会出现这种现象呢? 经过深入研究, 发现一种称为x 蛋白的物质参与了这种转变, 当prpc 与prpsc 的第96 ～167 位氨基酸结合, 同时prpscC 端残基再与x 蛋白结合, 这时促使prpc 变构成prpsc。 3、流行病学 BSE 患牛的比例: 最近, 美国和冰岛的科学家对BSE 蔓延又有新解释, 他们认为, BSE 的传播与生活在农场干草中的螨虫有关。 4、临床症状 BSE 和痒病在临诊上有许多相似的地方, 最大的区别是BSE 很少出现搔痒症状。神经症状可分为三个类型。 惊恐不安，有攻击性 5、病理变化 牛海绵状脑病无肉眼可见的病理变化, 也无生物学和血液学异常变化。典型的组织病理学和分子学变化都集中在中枢神经系统。牛海绵状脑病有三个典型的非炎性病理变化: 病理变化 神经纤维网空泡 分子病理学变化: 除了痒病家族应有特征性组织病理变化外, 牛脑组织提取液中还含有大量的异常纤维( SAF) , 可用电镜负染技术观察到, 这对牛感染牛海绵状脑病的确诊非常重要。 6、诊断 机体感染BSE后既无任何炎症, 也不产生免疫应答, 所以该病至今尚无血清学诊断方法, 病牛的血液生化指标也无显著异常。因此本病的诊断主要依据流行病学、临床症状和组织病理学进行初诊, 通过死后脑组织采样, 检测SAF以确诊BSE。 6.1 　病理学方法 病理组织解剖及动物传递传染实验多用于发病后期及死后诊断，用任何新方法做出的阳性结果均需用此方法作以最终判定。 6. 1.1 组织病理学方法 是对BSE 感染的脑超薄切片进行电子显微镜观察，从而确诊BSE 疾病的一种方法。但这种检查一般是在疾病发展的后期进行，难以实现BSE 的活体检测。 6.1.2 动物试验 动物试验检测方法主要通过用怀疑感染患者的主要病变组织提取物注射到易感动物体内，通过观察易感动物的症状来诊断PrPsc。同种动物间的传播效率最高，而不同种动物间的传播具有种属屏障。 6.2　免疫学检测 6.2.1 Western blot Western blot是现在常用的蛋白质检测方法。主要原理是PrPsc在蛋白酶K 作用下产生PrP27230, 而PrPc 会被完全消化, 用antiPrP27230 抗血清与PrP27230 进行免疫反应即可检测出。由于样品需要蛋白酶K 预处理, 则不可避免地造成PrPsc 和少量PrPc 降解, 影响了该法的敏感性。 6.2.2　ELISA 此法是在western blot基础上建立的。进行检测时, 由于经蛋白酶K处理后, PrPsc 转变生成P rP27230, 后者吸附于塑料表面, 免疫反应性降低, 用硫氰酸胍变性后, 可使其表位充分暴露,免疫反应性增强。 6.2.3　免疫组化 免疫组化是利用标记的特异性抗体来显示组织切片上的PrPsc 。该法的主要原理是用单克隆抗体15B3 能区别PrPc和PrPsc, 并把PrPsc 沉淀而不沉淀PrPc, 可用于检测PrPsc。该法不但可以定性、定位研究P rPsc，还可以做到定量。 6.2