王亚文——白假丝酵母菌临床分离株的病性及耐药结果分析精要.ppt

* 白假丝酵母菌临床分离株的致病性及耐药性研究 王亚文 2008级 临床五年制 * 一、立项依据与设计思路 二、技术路线与方案 三、可行性与创新性 * 研究对象——白假丝酵母菌 菌群失调 机体免疫力降低 异位定植 白假丝酵母菌感染 * 临床难题 诊断难，作为正常寄生菌，致病性的检测具有重要意义，现有的检测方法耗时耗力。 治疗难，耐药菌住的产生。 * 研究进展 1 粘附因子 2 酸性蛋白酶 Candida Albicans acid Proteinase 3 形态及表型转换 * 实验目的 验证白假丝酵母菌的酸性蛋白酶活力作为致病性的评价指标的可行性。 了解本地区药物敏感情况，希望指导临 床用药。 * 二、 技术路线与方案 * 实验设计思路 收集、分离、鉴定 致病性研究 药敏试验 1.收集标本 2.菌落培养 3.涂片镜检 4.显色培养 1.蛋白酶活力实验 2.粘附性实验 药物敏感试验 * 病原菌分离、培养、鉴定 白假丝酵母菌 收集临床 标本120例 转种至显色培养基 35℃培养 48h， 依菌落颜色鉴定 镜下可见G+性圆 或椭圆形酵母菌， 有时可见芽管 分离菌落， 格兰染色， 高倍镜检 观察菌落形态， 有酵母样念珠菌 生长为培养阳性。 标本接于沙保 弱培养基35℃ 培养24 ～72h A、B分为 假丝酵母菌菌落C、D分为高倍镜下假丝酵母菌及其厚膜孢子 初步形态学鉴定结果 A B C D * 菌落呈翠绿色为白假丝酵母菌，粉红色为克柔氏假丝酵母菌 ，灰蓝色为热带 念珠菌 。 80株假丝酵母菌中分离出白假丝酵母菌59株，构成比最高为73.3％ 图5 念珠菌显色培养结果 * 产酶培养基37℃ 下培养24h恢复产酶活力 菌苔出现一个透明圈， 测量菌落及其周围 透明环直径。 37℃下培养48h 菌悬液 10μl点种于 YGM-牛奶培养基 酸性蛋白酶活力实验 * 阴性 白假丝酵母菌产酶率为100%,其中高活力株68%，中活力株20%,低活力株占12% R=透明环直径/菌落直径 R3为高活力，2R3为中活力，R2为低活力 图6 酸性蛋白酶实验结果 * 小鼠尾静脉注射0.2ml菌悬液， 对照组注射等量生理盐水 小鼠死后做病理切片 组织研磨液培养。 密切观察小鼠生存情况， 记录小鼠生存时间 菌株经YEPD肉汤活化 配制为1.8×108/ml菌悬液 健康小鼠随机分4组 空白对照组、高中低活力组 动物实验步骤 * 动物实验结果 图7 鼠肾研磨液培养菌落 小鼠肾脏组织研磨液涂片 白假丝酵母菌涂片 图8 鼠肾研磨液显色培养 图9 小鼠肾、肺、脾病理镜下形态 * 死亡率 平均生存时间（天） 高活力组 100% 1 中活力组 75% 3 低活力组 25% 8 空白对照组 0 ＋∞ 白假丝酵母菌的蛋白酶活力与其致病性呈正相关(p0.01) 表1 四组小鼠的死亡率与平均生存时间 * 药敏试验 制霉菌素 两性霉素B 氟康唑 酮康唑 伊曲康唑 临床常用 抗真菌药 * 药敏试验结果 1　 图10 同一菌株对5种抗真菌药物的不同反应 判读标准： 抑菌环直径≥19mm 为敏感≤14mm 为耐药 * 药敏试验结果 2 表2 白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性 * 三、可行性与创新性 * 可行性与创新性 实验结果提示在一定范围内酸性蛋白酶可以作为评价白假丝酵母菌致病性的指标。牛奶平板法检测酸性蛋白酶活力具有简单，省时，经济等优点，适于在基层医院推广使用。。 了解本地区白色念珠菌的药物敏感情况，丰富了这方面的数据空缺，指导临床用药。 * 谢谢各位老师，请批评指正！