c-abl，雌素受体β调控内皮型一氧化氮合成酶的研究.pdf

／／lIl／／／／一／／．I／／／I，／／／／／6／／／／119I／I／／17／／ll／I／1／／／i／4／／／／／／ 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………5 二、英文缩略语………………………………………………………………………10 三、论文 前言………………………………………………………………………………12刖舌………………………………………………………………………………12 实验材料与方法…………………………………………………………………19 实验结果…………………………………………………………………………29 讨论………………………………………………………………………………43 结论………………………………………………………………………………47 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………49 五、参考文献…………………………………………………………………………50 六、附录 综述一……………………………………………………………………………57 综述二……………………………………………………………………………73 在学期间科研成绩………………………………………………………………88 致{射………………………………………………………………………………89 个人简介…………………………………………………………………………90 ·中文论著摘要· c．Abl，雌激素受体p调控内皮 型一氧化氮合成酶的研究 刖 舌 雌激素及雌激素受体(ER)与女性心血管疾病密切相关。ER主要存在ERa 和ERB两种亚型。ERp在调节血脂代谢、抗氧化应激损伤、改善血管内皮功能、 抑制动脉粥样斑块形成、舒缩血管、减少心脏缺血再灌注损伤等方面起重要作用。 ERD在人体内主要分布于心血管系统、中枢神经系统、免疫系统、胃肠道，肾脏 和肺组织。人血管平滑肌细胞及内皮细胞、心肌细胞均发现有功能性ERB存在， 在动脉血管壁内层和中层细胞中都有ERB。多种心血管系统病理生理调控过程中 都有ERp的参与。大量的实验室基础研究发现ERp在高血压、血管内皮功能障碍、 左心室肥厚、心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病的发生、发展过程中起重要作用。 NOS(一氧化氮合成酶)系统包括三种不同的亚型：神经型一氧化氮合成酶 通过激活eNOS在内皮细胞产生；而激活的内皮细胞、炎性细胞、巨噬细胞、心 肌细胞、血管平滑肌细胞则通过iNOS产生NO。NO是一种气体信号分子，也是 一种内皮源性的血管舒张因子，参与心血管系统的广泛病理生理过程，在心肌细 胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞和炎症细胞之间的相互作用中起重要作用。NO 抑制缺血再灌注损伤，抑制炎症，抗氧化应激损伤，对抗心肌梗死损伤，阻止左 心室重塑，但过量的NO和氧化应激活性氧(ROS)共存则对心血管系统存在损 伤性作用。 c-Abl(cellular-Abelson 内的同源基因，是一个高度保守的基因，e,-Abl是非受体酪氨酸激酶。在正常生理 状态下，c-Abl可定位于细胞核、细胞质、线粒体、内质网等多种亚细胞结构，并 与胞内信号受体、激酶、磷酸酶、细胞周期调节因子、转录因子、细胞骨架蛋白、 核孔蛋白、蛋白酶体亚基等多种分子发生相互作用。其主要的生物学功能是参与 细胞周期和细胞凋亡调控，并在氧化应激和DNA损伤修复过程中发挥重要作用。 可通过其SH3、SH2结构域介导蛋白间的相互作用。其中SH3结构域能特异性识 别富含脯氨酸的PXXP(P代表脯氨酸，X代表任意氨基酸)序列。对ERp的序 发生相互作用。据此我们假设c．Abl可与ER[3相结合，ER[3可以上调eNOS表达； e-Abl可促进ER[3对eNOS表达的上调作用，并通过实验初步证实这一假设。 实验方法 1、我们设计人ERl3，eNOS启动子报告基因引物，PCR扩增基因，酶切，连接 报告基因载体。 GST-SH2和GST-SH3交联的GSH珠子孵育