cxcr4特异拮抗剂amd3100对小鼠角膜碱烧伤新生血管的治疗作用及其机制研究.pdf

血管的治疗作用及其机制研究 [摘要] 目的：探讨结膜下和腹腔注射AMD3100对于C57／BL小鼠角膜碱烧伤新生血管的治 疗作用及其机制。 方法：1)采用碱烧伤建立C57／BL小鼠角膜新牛血管动物模型；采用免疫组织化学染 色、RT-PCR和WesternBlot检测碱烧伤后不同时间点角膜组织中SDF．1和CXCR4 的表达情况；2)角膜碱烧伤后通过结膜下和腹腔注射给予CXCR4特异性拮抗剂 AMD3 100，随机分为4组：结膜下注射组、结膜下注射对照组、腹腔注射组和腹腔 注射对照组；在不同时间点观察角膜的炎症反应和新生血管形成情况：检测各组角膜 况。3)采用流式细胞技术，检测结膜下注射和腹腔注射AMD3100后不同时间点小鼠 外周血液中EPCs的数量。 结果：1)止常C57／BL小鼠角膜组织可微量表达SDF．1、CXCR4mRNA和蛋白。SDF．1、 CXCR4 mRNA和蛋白的表达于碱烧伤后3d开始可见增高，7d达高峰，14d时开始下 降t耳仍高于正常水平；2)结膜下注射组AMD3100角膜的炎症指数、微血管密度、 VEGFR2和CD34的表达水平等均低于对照组和腹腔注射组，差异有统计学意义。角 膜碱烧伤后，各组之间SDF．1和CXCR4的表达水平未见显著性差异。腹腔注射组各 时间点外周血中EPCs的数量均显著增加，而结膜下注射组EPCs的数量与注射前差 异无统计学意义。 结论：SDF．I／CXCR4在碱烧伤后小鼠角膜组织中表达增加，可能在角膜碱烧伤的炎 症和新牛血管的形成和发展过程中发挥重要作用。角膜碱烧伤小鼠腹腔注射 AMD3100可显著增加外周血EPCs的数量，而结膜’卜．注射无此效J娩。结膜下注射 AMD3100可减少小鼠角膜碱烧伤后新生血管的形成，其机制可能是通过竞争性拮抗 聚集有关。 VEGFR2，CD34，炎症指数，微血管密度，动员 摘 要 角膜新生血管(corneal 伤、感染性角膜疾病、非感染性角膜疾病及角膜变性等的显著特征之一，也是角膜移 植术后发生排斥反应的高危因素。在发达国家，新生血管化引起的眼部疾病已占失明 原因的首位。在我国，它所引起的失明也已成为目前所面临的突出问题之一，也是临 床上最棘手的问题之一。角膜新生血管的发生是一个极其复杂的病理过程，与角膜损 伤后新生血管形成因子和抑制因子之间的平衡失调有关。然而，确切的发生机制却尚 不清楚。研究角膜新生血管的发生机制，探讨其治疗手段是角膜病领域的重要内容。 cell．derivod 基质细胞衍生因子．1(stromal SDF．1／CXCR4轴在介导炎症反应、造血干细胞迁移及归巢、恶性肿瘤尤其是血液肿 瘤的浸润转移以及HIV感染等方面发挥着重要的作用。虽然VEGF仍是目自订为止发 现的功能最强烈的促血管因子，但是近年来的研究证实，SDF．I／CXCR4广泛参与体 内各种炎症以及新生血管形成有关的疾病，也与眼部新生血管性疾病关系密切。 (endothelialprogenitorcells，EPCs)在原位分化、聚集、形成心脏和大血管的始基以及 胚胎和胚胎外的毛细胞血管；血管生成是指血管内皮细胞的增殖和迁移，从已存在的 血管发芽或非发芽的方式生成新的毛细血管。曾经认为血管发生仅发生于早期胚胎形 成阶段，近年来，随着在外周循环中发现EPCs，在缺血刺激下EPCs可聚集到血管 生成部位，证明骨髓来源的EPCs能够迁移到血管形成活跃的组织，参与病理和生理 性血管形成。生理状态下，EPCs贮存于骨髓中，外周血中的EPCs数量很少。在某 种生理或病理状态下骨髓中的EPCs可被动员进入外周血。虽然EPCs的具体动员机 制尚不清楚，但是大量的研究证实，SDF．1／CXCR4轴是介导造血干细胞归巢和动员 的最重要的因素。SDF．1主要在骨髓基质细胞及骨髓内皮细胞表达，SDF．1唯一的受 一3一 第二军医大学博士学位论文 调能介导干／祖细胞归巢到缺血组织参与新生血管的形成。 体没有交叉反应，它与CXCR4有很强的结合力，并且一旦结合，其抑制效应至少可 100作 为骨髓细胞的动员剂被应用于治疗性血管新生的研究中。还有学者研