cugbp1基对结直肠癌增殖侵袭功能的研究.pdf

中文摘要 摘要 结直肠癌是常见的消化系统疾病，临床上主要采取以手术为主、化疗和放疗为辅 的综合治疗。但结直肠癌总体治疗效果尚不理想，术后5年生存率一直徘徊于50％～ 6096，肝转移是治疗失败的主要原因。约2096～25％的患者在临床确诊时已发生肝转移， 根治术后肝转移的发生率仍可高达20％～25％，结直肠癌死亡的患者中约50％以上存在 肝转移。尽管研究者对结直肠癌肝转移已经进行了大量研究，但是其机制尚未明确。 因此，从分子生物学水平上探索结直肠癌肿瘤细胞增殖和侵袭能力和机制的研究，对 于结直肠癌以及肝转移的早期预测和诊断，从而提高生存率具有重要意义。 基因治疗(genetherapy)是将功能基因转移至患者体内以纠正有缺陷的基因或 赋予患者功能，以达到临床治疗或是预防疾病的目的。通过转基因技术，可使导入的 DNA序列干扰癌基因表达、恢复抑癌基因功能及启动某种新的功能等。RNA干扰(RNA 中形成的一种内在基因表达调控机制。目前，RNAi技术已经广泛应用于基因功能鉴定， 基因表达转录后调控等热门研究领域，并为多种疾病的基因治疗提供新的思路。 本研究第一部分利用基因芯片杂交技术筛选结直肠癌肝转移组与结直肠癌无肝 转移组中差异表达的基因，并用实时荧光定量PCR技术验证具有显著差异表达的基因。 基因芯片和RT—PcR验证结果均显示RNA结合蛋白(RNA binding 结合蛋白1(CUG-bindingprotein1，CUGBPl)是其中较显著表达上调的基因。 筛选出可有效抑制CUGBPl表达的干扰序列。荧光显微镜观察结果显示，所构建的慢病 毒载体可高效转染293T细胞。Westernblot结果显示，所设计的3段siRNA中，靶序列 此shRNA载体进行慢病毒的包装。 形成实验、流式细胞仪检测和侵袭转移实验结果表明，上述结肠癌细胞的生长和增殖 受到到明显抑制，克隆形成率明显降低，细胞周期中细胞阻滞在G1期，复制能力和 增殖指数明显降低，表明CUGBPl具有影响结直肠癌细胞的增殖、细胞周期和侵袭转 移的功能。 综上所述，本研究通过基因芯片技术筛选出在结肠癌肝转移与无转移组中显著差 2 中文摘要 胞SW480和DLD一1，可显著抑制CUGBPl mRNA及蛋白的表达，上述细胞株内CUGBPl受 到敲减和沉默后，Sw480和DLD—l细胞增殖受到明显抑制，克隆形成率明显下降，细 胞周期阻滞于G1期，侵袭能力减弱。本研究结果提示CUGBPl基因具有促使结直肠癌 肿瘤细胞增殖和侵袭的功能，可作为结肠癌治疗的潜在作用靶点。 关键词：RNA结合蛋白；CUGBPl；RNA干扰；结直肠癌肝转移；基因芯片 中图分类号：R735．3 英文摘要 ABSTRAGr in cancerisoneofthemost cancers C010rectal prevevant digestiVesystem． and arethecurrentcuratiVe resection， radiotherapy Surgical chemotherapy althouthwithnot effectduetothe1ivermetastasis． treatment， perfect