egr-1特异骗寡核苷酸调控原代培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖及迁移的机制研究.pdf

培养的大鼠血管平滑肌 肌细胞迁移 前言………………………………………………………………………………………………………”42刖舌………………………………………………………………………………………………………”42 材料与方法………………………………………………………………………43 实验结果…………………………………………………………………………．46 讨论………………………………………………………………………………………………………．．53 结论………………………………………………………………………………………………………·．56 四、参考文献…………………………………………………………………………·57 五、本研究创新性的自我评价………………………………………………………“ 六、附录 综玉苤………………………………………………………………………………………………………一65 在学期间科研成绩………………………………………………………………82 致谢………………………………………………………………………………………………………“83 个人简介…………………………………………………………………………84 ·中文论著摘要· Egr．1特异诱骗寡核苷酸调控原代培养的大鼠血管平 滑肌细胞增殖及迁移的机制研究 刖 吾 smoothmuscle 血管平滑肌细胞(vascular cell，VSMC)过度增殖在动脉粥样硬 化、血管成形术后再狭窄等血管增殖性疾病的病理生理过程中起着重要作用，是 引起血管内膜异常增生、血管重塑及血管再狭窄的主要细胞成分之一。从基因治 疗角度调控VSMC的增殖、迁移及凋亡是当前心血管疾病防治领域的研究热点之 一。早期生长反应因子-l(earlygrowthresponsefactor-1，Egr-1)是一种锌指结构 factor，TF)，调控着多种与VSMC增殖相关基因的表达， 转录因子(transcription 诱导VSMC的分裂、增殖和内膜增生等。在外源性刺激时Egr-1表达增多，促进 VSMC增殖，导致血管再狭窄等病理性血管修复反应，抑制其表达能够有效防止 VSMC的异常增生，从而达到治疗疾病的目的。诱骗寡脱氧核苷酸(decoy ODNs)技术是将与TF靶相结合位点(顺式作用元 oligodeoxynucleotides，decoy 件)序列相同的人工合成双链寡核苷酸导入细胞内，竞争性诱骗TF与其结合，使 TF所调控的能促进细胞增殖的下游基因表达受抑，从而在转录水平上达到抑制细 胞增殖的目的。VSMC增殖、凋亡及迁移是动脉粥样硬化、再狭窄发生发展的关 键因素，细胞周期又是调控VSMC多种病理过程的最终共同通路。因此，在本研 ODNs，转染原代培养的大鼠 究我们人工设计合成了针对Egr-lmRNA的decoy VSMC，观察转染ODNs后对Egr-1、细胞周期、增殖、凋亡、迁移及其相关基因 ODNs调控VSMC增殖、凋亡及迁移的 表达变化的影响，进一步探讨Egr-1decoy 作用机制和途径，为基因治疗血管增殖性疾病提供一个新的思路。 实验方法 1、Egr-1诱骗及诱骗对照寡脱氧核苷酸(decoy ODNs和decoy ODNs SCR)的设计合成 ODNs)基因序列为： Egr-1的诱骗寡脱氧核苷酸(decoy CCCTCGCCC 上游5’．TCG CCGCTAAGGG．3’ 下游3’．AGCGGGGGCGGGGGCGATTCCC．5’ ODNs S