fibulin1是肝癌转移的潜在血清诊断标志物.pdf

中文摘要 专业： 外科学 博士后： 刘 炜 合作导师： 陈规划教授 摘要 研究背景 肝癌是常见的消化道肿瘤，是造成患者死亡率最高的恶性肿瘤之一。虽然随着对肿 瘤的基础研究、临床治疗新技术的发展和抗肿瘤新药的开发，人类对肝癌的认识和诊治 已经取得了长足进步，但是肝癌的总体预后情况仍没有得到显著的改善。影响肝癌病人 长期生存的最大障碍，就是肿瘤的转移和复发。而迄今为止，在评价肝癌的预后、转归 方面，还没有具体、可靠的指标，更没有能准确预测肝癌转移和复发的肿瘤标志物。要 想改善肝癌的治疗效果，提高患者的生存率，就必须从源头上找到可靠、灵敏、特异和 可方便快捷检测的生物学标志物，能指导肝癌的治疗选择和做出合理的预后判断，并对 肿瘤的转移和复发能及时发现、早期治疗。 血清富含人体几乎各种组织、细胞来源的蛋白质。血清中蛋白质的变化可以反映出 入体的各种生理和病理状态，因此是临床疾病诊断、病情监控和预后判断的重要检测对 象。蛋白质组学，是对一个细胞、组织或个体某一时空表达的全部蛋白质进行系统研究 的科学。近年来，发展迅速的蛋白质组学技术已被广泛应用于筛选血清中与肿瘤相关的 蛋白质分子的研究中，并发现了大量以往传统手段无法得到的新型肿瘤诊断标志物，提 高了人们对肿瘤的认识和临床诊治的水平。 本研究，采用荧光胶内差异双向电泳(2．DDIGE)联合基质辅助激光解吸离子化． 串联飞行时间质谱(MALDI．TOF／TOFMS)的蛋白质组学研究方法，对肝内转移和未 转移肝癌患者以及正常人的血清进行分析，鉴定转移和未转移肝癌患者血清中表达有差 异的蛋白质，筛选可能作为肝癌转移的血清学标志物。本研究不仅有助于从整体水平了 II 中文摘要 解肝癌转移的血清蛋白质表达情况，也将为临床早期诊断肝癌转移提供潜在的预警标志 物。 研究方法 1．收集正常对照、肝内转移和未转移肝癌患者的血清和组织样本，用以筛选和验证与 肝癌转移相关的蛋白质；为评价筛选出的标志物的有效性和特异性，同时收集乙型 肝炎、乙肝肝硬化和其它消化道肿瘤患者的血清样本。 2．正常对照、肝内转移和未转移肝癌患者的血清各取12例，进行2．DDIGE和 MALDI．TOF厂rOF MS分析，鉴定有显著性差异的蛋白质。 3．在收集的肝癌患者血清和组织标本中，用westemblot、免疫组织化学等方法验证筛 选的潜在标志物的有效性。 4．在收集的乙肝、肝硬化以及其它消化道肿瘤的血清中，用westernblot等方法验证 筛选的潜在标志物的特异性。 结果 1．共收集正常健康对照血清100例，有效的肝内转移肝癌和未转移患者血清各50例， 肝癌组织标本24例；乙肝、乙肝肝硬化患者血清各20例，胃癌患者血清16例， 结肠癌患者血清1l例，食管癌患者血清4例。整理了完整的患者病例资料信息。 2．正常对照、肝内转移和未转移肝癌患者的血清各12例，经过2．DDIGE和MS分析 发现，与肝内未转移肝癌患者和正常成人血清相比，肝内转移肝癌患者血清中有19 10 等15个蛋白质表达下调。 3． 以fibulin-1为研究对象，经westernblot和免疫组织化学实验证实，在肝内转移肝 癌患者的血清和组织中，fibulin-1的表达量都有显著性升高。 4．Western 瘤的患者血清中的表达无显著性差异。 结论 1．肝癌患者血清中，fibulin．1等19个蛋白质的表达异常可能与肝癌转移相关。 2．Fibulin．1在肝内转移肝癌患者血清呈高表达，并具有一定特异性，可作为血清中判 IlI 中文摘要 断肝癌转移的潜在生物学标志物。 关键词：肝细胞性肝癌：转移：蛋白