mapk通路抑剂对pten缺失人子宫内膜癌细胞的作用及其机制研究.pdf

中lII大学博J：后出站报告 MAPK通路抑制剂对PTEN缺失人了宫内膜癌细胞的作用及机制研究 MAPK通路抑制剂对PTEN缺失人子宫内膜癌细胞的 作用及机制研究 中文摘要 背景与目的 子宫内膜癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7％， 严重威胁女性健康，其发生的分子机制尚不清楚。它的发生是一漫长过程，早期 发现足有效治疗的关键。近年研究表明，在其发生发展过程中抑癌基因的失活、 突变和信号通路的异常激活可能发挥了重要作用。 MAPK家族信号通路是引起细胞生物学反应的重要信号传导系统，是细胞 外与细胞内的信号转导的交汇点，其在肿瘤的形成、进展和转移中都扮演着重要 角色，该通路成员已经成为肿瘤新药研制的分子靶点之一。目前研究发现子宫内 膜癌的发生发展与一些信号通路的活性改变密切相关，其中主要包括MAPK和 EGFR两条信号通路。 PTEN作为一个抑癌基因，在细胞生长、凋亡中具有重要生物学功能。迄今 为止，已有大量研究证实PTEN基因对整合多条上下游信号通路有重要作用。许 多前期研究也发现，相关信号通路仅在PTEN缺失情况下对相关信号通路抑制剂 敏感。而PTEN基因在人子宫内膜癌中的丢失率可高达60％～80％。因此，本实 验中我们使用稳定转染方法改变两株子宫内膜癌细胞中PTEN表达，旨在探讨相 关信号通路抑制剂诱导不同PTEN表达下人子宫内膜癌细胞的凋亡和增殖抑制 等情况，为选择以相关信号通路为靶点的子宫内膜癌治疗，提高临床疗效提供一 定实验基础。 方法 疫组化法和western V 巾IIJ大学博。1：后m站报告 MAPK通路抑制剂对PTEN缺失人子宫内膜癌细胞的作用及机制研究 HEC．1 A细胞中p38MAPK信号通路的活性。 2．PTEN小分子干扰RNA及PTEN基因转染后，激光共聚焦显微镜检测 PTEN蛋白表达；流式细胞术、MTT法、实时定量PCR及westernblot分别检测 细胞干预后子宫内膜癌细胞早期凋亡及细胞周期、细胞增殖活性、p38MAPK下 游底物ATF．2 蛋白的磷酸化水平、磷酸化elF4E蛋白、凋亡相关蛋白cleaved caspase．3及Bax 表达。比较PTEN缺失和表达情况下人子宫内膜癌细胞Ishikawa及HEC．IA对 SB203580的作用及可能作用机制。 裸鼠皮下移植瘤瘤体，DMSO和PBS注射组作为对照。Westemblot检测瘤体 PTEN、磷酸化p38MAPK蛋白表达、比较注射对裸鼠皮下移植瘤牛长的影响、免 疫组化法分析瘤体中PCNA(增殖细胞核抗原)及Ki67(细胞增殖抗原)蛋白表达、 HE染色观察裸鼠肝脏和肾脏的形态学结构。探讨PTEN缺失或表达下子宫内膜 癌细胞中p38MAPK信号通路抑制剂的体内作用。 结果 HEC．1A细胞(P0．05)。 PTEN PTEN null，HEC．1A 失lshikawa及HEC．IA细胞生长显著抑制、细胞发生早期凋亡并引致细胞发生 Gl期阻滞；细胞内ATF．2 mRNA表达下调、p38MAPK通路磷酸化水平均降低、 磷酸化elF4E及4E—BPI蛋白表达均显著下降，同时cleaved easpase一3及Bax表 变，与PTEN缺失两种细胞比较这些差异均具有统计学意义◇0．01)。 VI 中Ih大学博I：后出站报告 MAPK通路抑制剂对PTEN缺失人子宫内膜癌细胞的作用及机制研究 3．Western 人子宫内膜癌PTEN缺失Ishikawa细胞裸鼠皮下移植瘤牛长均有明显抑制作用， 抑瘤率可达59．1％；免疫组化示Ishikawa细胞裸鼠皮下移植瘤瘤组织细胞浆中 比，差异有显著性(尸O．05)；注射后裸小鼠肝脏和肾脏组织结构正常。而对PTEN 表达HEC．1A细胞裸鼠皮下移植瘤则无明显上述改变，与Ishikawa细胞裸鼠皮 下移植瘤比较这些差异均具有统计学意义p0．01)。 结论 1．二种子宫内膜癌细胞中均存在p38MAPK信号通路激活，这