nav1.8在癌痛大鼠痛觉过敏维持机制中的作用研究.pdf

NavI．8在骨癌痛人鼠痂觉过敏维持机制中的作川研究 摘要 癌痛是长期困扰肿瘤病人的问题之一，不仅影响病人的情绪和生活质量，而 且可能成为病人及家属决定停止积极治疗的一个重要因素。因而研究癌痛的机 制，解决癌痛之苦成为临床上的迫切需要。临床最常见的三大肿瘤为肺癌、乳腺 癌、前列腺癌，此类肿瘤晚期很容易发生骨转移，而骨癌痛则是慢性癌痛最为常 见的一种，因此从研究骨癌痛的发生发展机制入手揭开癌症痛的机制有重要的临 床意义。 由于缺乏合适的研究模型，癌痛的研究进展远远落后于炎症痛和神经病理性 疼痛。近年来先后出现了一批成功的骨癌痛模型，模型制作多采用骨髓腔内直接 接种肿瘤细胞的方法。骨癌痛模型将肿瘤局限在骨髓腔内，从而最大程度地减少 了肿瘤广泛的系统性影响。在这些骨癌痛动物模型上可以观察到许多与临床症状 类似的疼痛行为学表现，如自发性疼痛、痛觉过敏等。这些模型的出现大大加速 了癌痛机制研究的进程，为寻找有效的癌痛治疗手段提供了良好的契机，骨保护 素等在模型上已被证明能有效抑制癌痛。目前研究认为，骨癌痛是一种机制独特 而复杂的慢性疼痛，尽管癌痛含有炎症痛以及神经病理性痛的成分，但是癌痛决 不是炎症疼痛以及神经病理性疼痛的简单总和。因此，有必要深入研究癌痛机制 并探索有效的癌痛治疗方法。 而电压门控性钠通道被认为在疼痛通路中起重要的作用，钠通道各亚型的运 输，分布和密度，以及通道本身内在特性在相当程度上影响了外周感觉神经元的 兴奋性，而伤害性感受神经元的电活动促成了疼痛的产生。河豚毒素不敏感 (1]Ⅸ一R)的Navl．8钠通道专一表达在外周感觉神经元上，产生慢失活1]Ⅸ．R 钠电流，此通道是其所在细胞动作电位去极化期的钠电流的主要通道，被认为在 伤害性感受器外周致敏中发挥了重要作用，因此Navl．8在疼痛通路特别是在外 周敏化的作用是疼痛机制研究的热点。Nayl．8在炎症痛模型DRG神经元上表达 上调，TTX．R钠电流明显增加。此外，Navl．8也参与了神经病理性疼痛的维持。 鞘内注射反义寡核苷酸选择性降低Navl．8表达，可有效的阻止由慢性神经或组 织损伤引起的痛觉过敏和异常性疼痛。遗传学的方法技术则更有力的支持了 Navl．8在疼痛通路中不可或缺的作用，Navl．8基因缺失小鼠对伤害性机械性刺 激表现出明显的痛觉缺失，炎症性痛觉过敏延迟发展。 目前癌痛模型上电压门控性钠通道表达调节的相关研究还罕见报道。本研究 着眼于电压门控性钠通道Navl．8在骨癌痛外周敏化机制中的作用，通过Walker 256乳腺癌肉瘤细胞建立大鼠胫骨骨癌痛模型，从不同层面探索Navl．8参与的 第．二军医人学博十论文 骨癌痛维持机制。研究内容主要包括以下四个方面：(1)大鼠胫骨内注射walker256 PCR、 乳腺癌细胞建立骨癌痛模型及进行疼痛行为学评估；(2)通过REAL．TIME 免疫印迹和免疫荧光染色观察DRG神经元中Navl．8钠通道mRNA和蛋白表达 情况； 钠通道的功能变化；(4)鞘内给予Navl．8反义寡核苷酸对骨癌痛大鼠疼痛行为的 影响。通过以上实验探讨钠通道Navl．8是否和如何参与了骨癌痛维持过程中的 痛觉过敏。结果如下： 1．骨癌痛模型建立 雌性Wistar大鼠胫骨内接种2x105个Walker256细胞，术后第10天起观 察到自发性运动痛评分进展性增高；诱发痛行为主要表现为机械性痛觉过敏而无 明显的热痛觉过敏，与文献报道一致。在骨癌晚期(术后第17天起)可以观察 到镜像痛行为。影像学结果提示，术后第21天骨质破坏明显，部分大鼠出现病 理性骨折。病理检查可见晚期胫骨外观呈膨胀性增生，胫骨内有肿瘤生长，骨质 破坏和增生同时存在。脊髓切片GFAP染色见患侧全层星形胶质细胞明显肥大增 生。以上结果表明大鼠骨癌痛模型成功建立，模型主要行为学特征为自发性运动 疼痛机械性痛觉过敏和机械性痛觉过敏。 一 2．Nayl．8钠通道在骨癌痛大鼠DRG神经元中的表达下调 骨癌痛大鼠在术后16—19天疼痛行为明确且稳定。在此期间，骨癌痛大鼠双 mRNA水平显著降低。Westernblot结果显示，骨 侧腰段DRG神经