shp-2在hv致宫颈癌中的免疫作用.pdf

·中文论著摘要· SHP．2在HPV致宫颈癌中的免疫作用 目 的 SHP．2是一个进化上相对保守的蛋白酪氨酸磷酸酶，由PTPNl1编码的SHP．2 也是非受体蛋白酪氨酸磷酸酶中的一员，并且被认为参与许多细胞因子和生长因 子信号转导过程的激活。在细胞浆中细胞信号传导通路激活后，SHP．2是信号通 路的下游受体。SHP一2作为细胞传导通路中负调节因子，可以刺激细胞增殖和分 化。 致[8】。尽管HPV感染与宫颈癌有因果关系存在，但确切机制仍不清楚。在病毒激 活的免疫反应中，S船一2常会伴随出现，一般认为S耶一2是这类免疫反应的负 性调节因子。SHP．2还可能抑制T细胞和B细胞的活化。由以前的研究可知，SHP． 2抑制TRIF依赖的I型干扰素(IFN．0【／p)和炎症细胞因子的产生，故在宫颈组 织中SHP一2也作为负调节因子发挥作用。 目前，宫颈癌的发生发展机理还不十分清楚，预防和治疗手段远非完善，，治 疗效果也不尽如人意。为了探讨宫颈癌患者SHP．2的表达是否有变化，研究SHP．2 与肿v感染之间的关系，本研究选取45例宫颈癌患者，32例宫颈上皮内瘤变患 者(C烈)，14例正常宫颈进入本研究。本研究从宫颈组织、血液及细胞三个水 平检测HPV感染相关的宫颈病变中免疫调节因子SHP．2的表达状况，HPV感染 状况及IFN．B等细胞因子变化，可以明确SHP．2与HPV感染相关的宫颈病变的 关系，以期证实HPV感染的宫颈癌患者中SHP．2高表达，两者之间有相关性。 宫颈癌的发生。 方法 一、SHP-2在宫颈病变组织中的表达及其与HPV感染的关系 l、样本选择 选择中国医大盛京医院2008年6月一2009年12月妇产科住院患者进入本 研究。45例宫颈癌(I—-ⅡI期)患者，年龄从30岁到70岁，平均年龄48岁。 龄42岁。14例正常宫颈患者，年龄从30岁到62岁，平均年龄45岁。取材前 均未接受任何治疗。宫颈组织诊断在盛京医院病理科。 2、免疫组织化学法 分别检测IFN．B和SHP．2蛋白在上述三组患者宫颈组织中的表达情况。 3、导流杂交法检测HPVl6／18 检测HPV在上述三组患者宫颈组织中的表达情况。 4、Real-timePCR法 检测SHP-2的基因在上述三组患者宫颈组织中的表达情况。 二、SHP-2和IFN-B在宫颈病变患者血液中的表达情况 1、样本选择 选择中国医大盛京医院2008年6月一2009年12月妇产科住院患者进入本 研究。45例宫颈癌(I—Ⅲ期)患者，年龄从30岁到70岁，平均年龄48岁。 32例宫颈上皮内瘤变(CⅨ)患者(I一Ⅱ)，年龄从30岁到60岁，平均年 龄42岁。14例正常宫颈患者，年龄从30岁到62岁，平均年龄45岁。取材前 均未接受任何治疗。宫颈组织诊断在盛京医院病理科。 2、Ficoll分层液分离人外周血单个核细胞 取上述三组患者新鲜抗凝血，用Ficoll分层液分离出人外周血单个核细胞。 3、Western blot方法 检测上述三组患者人外周血单个核细胞中SHP-2蛋白的表达情况。 4、酶联免疫吸附实验 检测上述三组患者人外周血IFN．B的表达情况。 2 产生 1、细胞培养 Eagle’s Minimum EssentialMedium)。 THP．1细胞培养于含10％热灭活的FBS和0．05 RPMll640培养液。 上述两个细胞共培养。 2、干扰S胁2基因的表达 SHP-2 si对妊干扰片段瞬时转染THP．1细胞，干扰SHP．2基因的 表达。 3、SHP-2封闭肽(blockingpeptide)封闭实验 h和24h)，作 将SlIP．2封闭肽以不同浓度(O、0．5、2．5ug／m1)和时间(2 用于THP．1细胞，进行WesternBlo