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温州医学院硕士学术论文 一种不同于entosis的细胞胞内死亡 摘要 目的与意义t 细胞进出运动(cell—in-ceU)现象分为同种与异种两大类型，我们拟通过比 较两大类细胞胞内死亡来探讨免疫细胞进入肿瘤细胞以及肿瘤细胞进入肿瘤细 胞的形成机理和生物学意义，并可为研究免疫细胞与肿瘤细胞相互作用提供一个 独特的研究体系。 材料和方法： 1．采用吉姆萨染色、荧光标记、Realtime细胞实时追踪、共聚焦扫描、电 镜超微结构分析等方法对细胞形态进行观察分析，并用不同的NK细胞与肿瘤细 胞检测了细胞进入发生的范围。 2．利用免疫荧光、流式、荧光底物等方法对细胞的特异性蛋白进行标记检 测，比较与吞噬运动、细胞凋亡、entosis现象的异同点。 3．利用siRNA技术、免疫荧光、药物处理等方法，检测参与细胞进出运动 的关键蛋白及信号通路。 结果： 1．记录到NK细胞进入肿瘤细胞的三种命运，以及NK细胞周围的空泡结 构。NK细胞伸入肿瘤细胞现象发生广泛。 2．NK细胞伸入肿瘤细胞与吞噬运动的识别信号无直接关系，NK细胞在肿 瘤细胞内死亡后的caspase处于活化状态，TUNEL(+)。 肿瘤细胞的比率，肿瘤细胞内PKA途径也会影响NK细胞的伸入率。 结论： NK细胞进入肿瘤细胞后大部分发生死亡，可能是肿瘤细胞反杀免疫细胞的 一种模式。伸入运动发生广泛，不存在MHC限制性，在干细胞中的伸入率很高， 因此我们认为伸入运动具有普遍性和保守性。 NK细胞进入肿瘤细胞是与吞噬运动完全不同的两种细胞运动，前者的效靶 细胞都参与到细胞进入过程中。Nk细胞进入肿瘤细胞后的死亡与同质细胞胞内 死亡的entosis是不同的，无论从形态变化还是生化改变，前者呈现典型的凋亡。 肿瘤细胞的一些表面粘附蛋白及骨架蛋白参与NK细胞进入肿瘤细胞的过 程中，某些蛋白在蛋白激酶的作用下发生磷酸化也会影响细胞进入的比率。 关键词：细胞进出；自然杀伤细胞；肿瘤细胞；凋亡；ezrin；entosis 温州医学院硕士学术论文 AnIntracellularCelIDeathDistinctedfromEntosis Abstract and PurposeSignificance： that Cell-in-cellmeanslivecellsareincludedwithina cell．There neighboring are cell—in-celland cell—in-cell．Our focusedonthe heterotypic homotypic study distinctionbetweenthetwokindsofeelldeathinsidecells． MaterialsandMethods： 1．Wb cell·in—cellstructions、历tIlGiemsa analysised staining,fluorescencelabeling, real-timecell severalkindsofNKcells trace,electron microscopy．Ourstudy研ed andtumourcells觞effectcelland cell． target 2． T0 NK examinewhethercellintotumourcellcouldb