一种新cd44异体在乳腺癌耐药细胞株中表达及其对乳腺癌细胞株生物学行为的影响.pdf

江苏 大学硕士论文 摘 要 目的：1．构建人CD44基因变异体(CD44 中，为深入研究CD44v基因的功能奠定基础。2．将人乳腺癌多药耐 BankNo．FJ216964) 药细胞株(MCF．7／Adr)中新发现的CD44v(Gene 殖方面的差异。 I齐HEcoR RT-PCR，获得全长cDNA模板，使用含有限制性内切酶Kpn I酶切位点引物进行PCR反应，从而获得带有酶切位点CD44基因产 物，PCR产物于1％琼脂糖凝胶电泳后切胶回收，并参照胶回收试剂盒 vector上，TA克隆后，提取质粒并测定含量及进行双酶切反应 simple I和EcoR1分别双 验证，将含阳性质粒转化菌进行DNA测序。4．Kpn 接，大肠杆菌扩增，小提质粒后酶切鉴定，阳性质粒进行测序验证。 l 江苏大学硕士论丈 MMP．9 mRNA表达情况，并收集细胞培养上清，离心后进行明胶酶谱 表达水平的影响。7．Transwell检测各实验组细胞侵袭力变化情况。8． western 节MMP．2及MMP．9表达的胞内信号转导机制。9．显微计数法及流式细 胞术检钡JJCD44v对MCF。7／CD44v细胞增殖能力的影响。 48小时后，通过 DNA测序验证。4．转染重组质粒pcDNA3．1．CD44v 流式细胞术检测发现CD44蛋白表达水平上调，表达率为(70．0±2．5) mRNA 质酸处理作用24小时后，MCF．7细胞株中MMP．2、MMP一9 表达明显上调，相应蛋白活性与mRNA水平呈现一致性改变，细胞侵 江苏大学硕士论文 使MCF．7／CD44v细胞增殖能力下降。 结论： Bank NO．FJ21 明显上调，这为进一步研究其功能打下了基础。2．在MCF．7细胞中， 的侵袭能力。3．透明质酸可能与CD44受体相结合，通过 侵袭力。5．CD44v过表达可以抑制MCF．7／CD44v细胞增殖能力。 关键词：CD44v，基质金属蛋白酶．2，基质金属蛋白酶一9，侵袭，乳 腺癌， 多药耐药， MAPK信号传导通路，增殖 III 江苏大学硕士论文 ABSTRACT human cloneCD44 from resistant Objective：To gene multidrug constructits vectorwhich the cells(MCF一7／Adr)andeukaryoticexpression lays the and for with groundwork resistance，invasion experimentsmultidrug proliferation． the betweenCD44v