三氧化二砷对腺囊性癌acc-2细胞acin1基因表达的影响.pdf

三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细 ACIN1基因表达的影响 摘 要 目的：研究三氧化二砷(arsenictrioxide,As O)对体外培养的腺样囊性癌细胞株ACC-2细 2 3 胞的生长影响及诱导凋亡作用，对ACIN1基因及蛋白表达的影响，探讨其抑制ACC-2细 胞生长和诱导凋亡的作用机制，为As O应用于ACC动物实验及治疗提供依据。 2 3 方法：体外培养腺样囊性癌ACC-2细胞，分为实验组和空白对照组，实验组于细胞指 数生长期加入不同浓度梯度 （2.0、4.0、6.0、8.0µmol/L）的含As O 细胞培养液，对照 2 3 12h 24h 36h 48h 组仅给予等量全细胞培养液，加刺激后分别培养 、 、 、 ，并持续观察各 时间点不同浓度As O 对腺样囊性癌ACC-2细胞的生长抑制作用和细胞凋亡的形态变 2 3 化，应用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学技术检测ACIN1基因和蛋白的表达变化。 结果:(1)AsO对ACC-2细胞的生长具有抑制作用，且随着药物浓度的升高及作用时间的 2 3 延长，细胞的生长抑制作用逐渐加强，即呈现时间浓度依赖性，显微镜下可见细胞变- 小变圆，细胞接触减少，细胞间隙变大，胞内颗粒增多，细胞核固缩，细胞密度增大并 有空泡样变，贴壁细胞减少，悬浮细胞逐渐增多，即大部分细胞呈现凋亡状态。 （2）RT-PCR结果显示ACIN1mRNA在空白对照组和实验组ACC-2细胞中均存在表 达，随着As O浓度的增加和作用时间的延长，其表达量略有下降，但不同浓度及时间 2 3 点总体比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同时间两两比较均无统计学差异（P 0.05 6.0 8.0 P 0 05 ＞ ），不同浓度仅 、 与空白对照组两两比较有统计学差异（ ＜ . ）。 （3）免疫细胞化学检测结果示ACIN1蛋白在细胞核和细胞浆均有表达，以细胞核为 主，ACIN1蛋白在对照组ACC-2细胞中存在基础表达，不同浓度As O 作用于ACC-2细 2 3 胞后，随浓度及作用时间增加，阳性颗粒逐渐向细胞核聚集并增强，平均光密度值 IOD/area ACIN1 （ ）逐渐增大，不同浓度、处理时间总体比较 蛋白表达量差异有统计学 意义且浓度和时间具有协同效应（P＜0.01）；两两比较，不同浓度比较差异均有统计 P 0.01 36h 48h P 0.05 PCR 学意义 （＜ ），不同时间除 与 外其余均有统计学差异 （＜ ），这与 结果不同。 1 As O ACC-2 2 ACIN1 结论：（） 2 3对体外培养的 细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。（） 仅在蛋白水平参与As O诱导ACC-2细胞的凋亡，其不同功能的转变依赖于细胞状态及 2 3 其他凋亡因子的水平和上游激活信号。