三萜皂苷对离体养的子宫内膜异位症内膜细胞作用的研究.pdf

英文摘要………………………………………………………………………3 研究论文三萜皂苷对离体培养的子宫内膜异位症内膜细胞作用的研究 引言………………………………………………………………………6 第一部分人子宫内膜细胞的体外培养及生物学特性研究 前言………………………………………………………………………．7刖舌……………………………………………………………………………．．7 材料与方法………………………………………………………………7 结果……………………………………………………………………………lO 附图………………………………………………………………………．1l 讨{仑…………………………………，………………………………………．．18 小结……………………………………………………………………………20 参考文献………………………………………………………………．．2l 第二部分三萜皂苷对体外培养子宫内膜细胞增殖、凋亡、周期和分泌 VEGF影响的研究 前言……………………………………………………………………………23日IJ舌……………………………………………………………………………23 材料与方法………………．：……………………………………………23 结果……………………………………………………………………………25 附图…………………………………………………………………………．27 附表……………………………………………………………………………28 讨{仑……………………………………………………………………………29 小结……………………………………………………………………………33 参考文献………………………………………………………………．．33 综述子宫内膜异位症模型用于中医药治疗机制研究的进展…………．．36 致谢……………………………………………………………………………．．53 个人简历………………………………………………………………………54 细胞 摘 要 发病，是造成育龄期妇女盆腔疼痛和不孕症的重要原因之一，严重危害着 广大妇女的身心健康，其发病率近年来有明显增高趋势。尽管关于子宫内 膜异位症的发病原因学说很多，但其发病机理及病因尚不明确。近年来， 我国学者对中药治疗子宫内膜异位症的作用机制进行了一些探索，发现许 多中药能够从多途径、多角度、多层次发挥治疗作用。广义上的三萜皂苷 是由三萜皂苷元和糖、糖醛酸和其他有机酸组成的，以四环三萜和五环三 萜两大类为主，均广泛分布于植物中。近年来，随着现代分离方法和结构 测定技术的应用，使三萜皂苷的研究有了突破性进展，三萜皂苷的多种重要 的生物活性和药理作用已被证实，如：抗癌、抗炎、抗过敏、治疗白血病、 抗病毒、降血糖、防治心脑血管疾病等。我们所研究的三萜皂苷是黑升麻 的提取物，本实验旨在通过建立子宫内膜异位症内膜细胞体外培养模型的 方法，研究该方法的可行性，探讨子宫内膜细胞的生物学特性的同时研究 三萜皂苷对子宫内膜异位症患者在位内膜细胞增殖、周期、凋亡及血管内 皮生长因子(VEGF)分泌的影响，探讨三萜皂苷用于治疗子宫内膜异位 症的可行性，为子宫内膜异位症的治疗提供新方法。 方法：1．取子宫内膜异位症患者的在位内膜，采用胰酶胶原酶复合消 化法，进行消化及体外培养，倒置相差显微镜观察内膜细胞的生长状态， MTT法观察内膜细胞的增殖能力，倒置相差显微镜、透射电镜及HE染 色观察细胞形态，免疫细胞化学染色，对人子宫内膜细胞进行鉴定。 2．取子宫内膜异位症患者的在位内膜，采用胰酶胶原酶复合消化法， 进行消化及体外培养和传代，取第3代内膜细胞分别给予浓度为 添加任何药物)，观察内膜细胞生长状态并计数绘制内膜细胞生长曲线， MTT法观察内膜细胞的增殖能力；用流式细胞学的方法检测不同浓度药 物对细胞周期和凋亡的影响。 中文摘要 定三萜皂苷对VEGF分泌的影响。 结果：1．所培养细胞为子宫内膜细胞，生长良好，在光镜下可观察到 两种细胞：一种是间质细胞，呈多边形或梭形，培养3，一-．4d后细胞平铺生长， 呈现中间稍宽、两端尖的形态，外形轮廓不