三羟异黄酮对结癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究.pdf

中文摘要 三羟异黄酮对结肠癌细胞增殖及凋亡的 影响及机制研究 摘 要 目的：本研究采用人结肠癌细胞LOVO为靶细胞，观察 17 13．雌二醇(17 GEN)对细胞增殖、凋亡的影响；检测三羟异黄酮作用细胞前 的细胞死亡特征和作用机制。 方法： (1)MTT比色法检测17B．雌二醇、三羟异黄 酮对细胞的生长抑制作用。(2)倒置光显微镜观察细胞形态 胞死亡特征，区分凋亡细胞与坏死细胞。(3)流式细胞仪检 细胞雌激素受体mRNA表达及三羟异黄酮对凋亡相关基因 bcl．2、caspase．3基因表达的影响。 结果： (1)MTT比色法检测三羟异黄酮及17ljl．雌二醇 对LOV0细胞增殖的影响，其结果显示两种药物均可抑制LOV0 细胞增殖，当作用时间相同时增殖抑制率与浓度正相关，呈 浓度依赖性，当药物浓度相同时增殖抑制率与作用时间正相 Il 关，呈时间依赖性。30mol／L三羟异黄酮即可对LOV0细 胞起到一定的增殖抑制作用，高浓度三羟异黄酮(120 nmol／L)对细胞有剧烈抑制作用，作用96小时后抑制率高 II 达89．63％。低浓度的17B．雌二醇(10mol／L)对LOV0细 胞也有抑制作用，但与高浓度1713．雌二醇相比较其增殖抑 中文摘要 制作用明显降低，其抑制作用也呈现时间依赖性。 (2)细 胞形态学改变：光学显微镜观察：倒置光显微镜下，对照组 LOVO细胞细胞数目均增多、贴壁状况良好、细胞多呈梭形 或多角形、大小适中铺满整个视野，核仁清晰、可见核分裂 u 相；60 后与对照组比较细胞数目减少、贴壁状况不好，形态不规则、 排列紊乱且有较多漂浮细胞，细胞出现不同程度的皱缩及空 泡、核质比率倒置、核分裂相减少，细胞密度下降，细胞膜 完整但出现发泡现象，细胞内可见多个折光性较强的圆形小 泡样结构和细胞出芽样改变，细胞间失去正常接触抑制，细 u 胞碎片增加、背景颗粒增多。60mol／L浓度的17B．雌二醇 处理细胞后，细胞停止增殖，细胞出现肿胀、变圆，呈较典 型坏死征象。荧光显微镜观察：对照组LOVO细胞大小基本 膜完整，细胞核结构正常；少量的死亡细胞被染成红色，细 ．胞可见下列规律性的变化：作用24h后部分细胞可见凋亡细 胞被染成蓝色，染色质高度浓缩、边缘化，凝集成明亮的团 块，即凋亡小体，部分细胞形态不规则，细胞变小，并有核 碎裂现象；一些细胞被染成红色，但可见明显的染色质凝集， 13．雌二醇后 即凋亡后继发死亡的细胞。给予不同浓度的17 未见以上凋亡细胞形态改变，经作用时间延长后可见部分细 胞肿胀，被PI染成红色荧光，细胞呈坏死形态。(3)流式细 胞仪检测结果：三羟异黄酮组细胞于作用后48小时较对照 组细胞出现了明显的细胞凋亡，在正常二倍体细胞的Go．Gl 期前出现的亚二倍体峰即为凋亡峰AP；凋亡细胞百分比由 中文摘要 3．16％增加至37．5％。17B．雌二醇干预细胞后，细胞周期发 生变化，G2／M期细胞比例明显增加，但无凋亡峰出现。(4) 黄酮对凋亡相关基因bel．2、caspase．3基因表达的影响： 雌激素受体J2l呈强表达。三羟异黄酮对凋亡相关基因bcl．2、 caspase．3 bCl．2表达呈浓度依赖性减弱。 结论：(1)人结肠癌细胞系LOV0表达雌激素受体基因， 但以雌激素受体B表达为主，雌激素受体Q仅有微弱表达。 (2)三羟异黄酮可明显抑制LOV0细胞的生长及增殖，抑制 作用呈现浓度一时间依赖性。三羟异黄酮对LOV0细胞的抑 制作用，其机制包括：抑制细胞增殖、诱导凋亡、改变细胞 17 B一雌二醇可明显抑制LOV0细胞的生长增殖，呈浓度一时 间依赖性，但17B一雌二醇无诱导LOV0细胞凋亡的作用，其 抑