中国人家族性腺性息肉病apc基因胚系突变的检测.pdf

郑州 大 学 2009 届硕 士研 究生 中国人家族性腺瘤 性 息 肉病 AP C 基 因胚 系突变 的检 测 中国人 家族 性 腺瘤 性 息 肉病 AP C 基 因胚 系 突变 的检 测 研 究生 崔伟佳 导师 张 明智教授 盛 剑 秋 副教授 郑 州 大 学第 一 附属 医 院肿 瘤 科 中 国 河 南 郑 州 450052 中文摘 要 背 景 及 目的 家族 性 腺瘤 性 息 肉病 (fam ilialadenom atou sPo l即 。515，FA p)是 一种 罕见 的常 染 色 体 显性 遗 传 性 疾 病 ，发病 率 大 约 为 1/5000一1/10000 ，临床 主 要表 现 为 大肠 内 多发 的腺瘤 性 息 肉(息 肉总 数 超 过 100 个 )，多数 患者在 青 年 时期 发病 ，如 不 及 时 治疗 ，则 几 乎 100 % 的患 者 发 生 癌 变 。FA P 是 由于 定位 于 sqZI 一解 2 的 A P C 基 因 发 生胚 系 突变 而 导致 的 ，A P c 基 因是 一个 肿 瘤 抑 制 基 因 ，含 有 一个 8538bp 的开 放 阅读 框 架 ，共 巧 个 外 显子 ，编 码 一 个含 2843 个 氨 基 酸 的蛋 白。A P C 基 因产 物 A PC 分 子 量 约 为 3 1okd ，是一个 多 区域 结合 蛋 白，包 括 N 一端 的寡 聚域 和犹称 域 、中间部 分 的大 量 的 巧 和 20 个 氨 基 酸 的重 复 区域 、和 包 括基础 域 、E B I 结合 域 、D L G 哺 乳 动物 同源 物 C 一端 。通 过 这 些 多结构域 ，A PC 结合 大量 的蛋 白使 妙 C 不仅 在 肿 瘤 抑 制 方 面 ，而 且 在 在 细 胞 分 化 ，粘 附 ，极 化 形 成 ，迁 移 ，发展 ， 凋亡 和神 经 元 功 能方 面起 作 用 ，妙 C 在 小肠 和 直 结肠 上皮 高表达 ，起 着在 时 间 和 空 间上 高度 调 节 增 殖 、迁 移 、分化 、凋 亡 等 肠 上 皮 更 新 现 象 的稳 态 的作 用 。大 多数 突变 为移 码 突变 和 无 义 突变 ，这 些 突变 导致 了分 子质 量 少 于野 生 型 蛋 白的截 短 蛋 白的 出现 。 家 族 性 腺瘤 性 息 肉病 患者 中约 有 60一80 % 的病 人 可 以检 测 到 妙 C 基 因 的突 变 8【]，约有 60 一70 % 的 FA P 患者 存 在 AP c 基 因 的微 小突变 ，突变 阴性 患者 中 10一巧% 则 为 AP C 基 因 的大 片 段 缺 失性 突变 。从 1991 年 妙 C 基 因被 鉴 定 以来 ， 迄今 己有 900 多个 胚 系 突变 被报 道 ，但 是 关 于 中 国人 家族 性 腺瘤 性 息 肉病 中 AP C 郑州大学 2009 届硕 士研 究生 中国人家族性腺瘤性 息 肉病 A PC 基 因胚系突变 的检测 基 因的胚 系突变研 究较少 ，因此 为 了进 一步研 究研 究 中国人家族性腺瘤性息 肉病 (EA p )A P c 基 因胚 系突变 的特 点 ，我们 设计 了本 实验研 究 。 方 法 1. 患者 收集 2002 一2008 在 北 京军 区总 医 院诊 断和 治疗 的 14 个 FA P 家 系 的 患者 ，研 究对 象均签署 知情 同意 书 。 2. 微 小 突变 检 测 抽 取 14 个 FA P 家 系 中的先证 者 的外周 血 ，从外 周 血 淋 巴细 胞 中提 取 基 因组 D N A ，对 A P C 基 因 的 巧 个 外 显 子包 括剪 接 区进 行 P C R 扩 增 ，用 直 接 测 序 法 对 扩 增 产 物 进 行 微 小 突 变 的检 测 ， 3. 大 片段缺 失 的检 测 对 A P C 基 因突变 检 测 阴性 的患者 运用 多重连 接 依赖