中药止泻液对鼠状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响的研究.pdf

广州医学院硕士论文 中药止泻液对鼠轮状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响的研究 中药止泻液对鼠轮状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响 的研究 硕士研究生：陈涣 导 师：龚四堂教授 中文摘要 目 的 1．轮状病毒性肠炎动物模型的建立 2．轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的改变 3．中药止泻液对轮状病毒性肠炎肠道水通道蛋白的影响 材料与方法 1．研究对象 清洁级昆明种乳鼠，由中山大学实验动物中心提供。 2．轮状病毒 人轮状病毒于2007年11月取自广州市儿童医院门诊诊断为轮状病毒感染患 儿的粪便。 猴轮状病毒(SAll株)由中国协和医科大学生物学研究所馈赠。 3．轮状病毒性肠炎动物模型的建立 空白组(A组)用冻融离心后的不含轮状病毒的细胞培养物150ul向乳鼠灌胃。 4．中药止泻液干预模型的建立 C，D组乳鼠分别于接种轮状病毒后第24小时，第48小时给予灌注止泻液 (1．869／m1)，每日三次，每次50ul。 广州医学院硕士论文 中药止泻液对鼠轮状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响的研究 5．取材 分离乳鼠肠段(空肠，回肠，结肠)，标记后置于液氮保存。 6．实时荧光定量PCR对肠道水通道蛋白的mRNA作定性与相对定量，由于mRNA 经过表达后成为蛋白质，两者成正比关系，所以可以通过mRNA推测蛋白质的性 质与数量。 1)肠道组织总RNA的提取 2)对总RNA行逆转录反应 3)实时荧光定量PCR检测肠道水通道蛋白l，3，4，8mRNA 7．结果用SPSSl1．0统计软件分析 结 果 1．轮状病毒性肠炎动物模型 乳鼠感染SAll株第2天后出现明显的临床腹泻症状，至少在感染后连续6 天动物大便中可检测到较高滴度的轮状病毒(rotavirus，RV)抗原；乳鼠感染人轮状 病毒后，连续观察6天均未出现腹泻症状，动物大便中亦未检测到RV抗原。 2．中药止泻液干预模型 干预组(C组)乳鼠在接种病毒液后48h，其中4只乳鼠出现明显的RV感 染症状，主要表现为腹泻(淡黄色水样便)，腹泻率为33％，喂毒后第3，4天， 4只腹泻乳鼠临床症状减轻，表现为排黄色糊状便，肠外症状不明显。接毒后第 5至7天，乳鼠均无腹泻，排黄色成形便。 干预组(D组)乳鼠在接种病毒液后48h，10只乳鼠均出现明显腹泻症状(淡 黄色水样便)，腹泻率为100％，接毒后72h，乳鼠腹泻程度减轻，接毒后第4，5 天乳鼠排黄色糊状便，接毒后第6，7天，乳鼠无腹泻，排黄色成形便。 3．实时荧光定量PCR结果 1)空白组乳鼠空肠，回肠和近端结肠肠道黏膜均有水通道蛋白1，3，4， 8mRNA的表达。 2) 空肠AQP8mRNA在腹泻组乳鼠中表达量显著高于空白组 (t=2．304．P0．05)． 2 广州医学院硕士论文 中药止泻液对鼠轮状病毒肠炎肠道水通道蛋白影响的研究 3) 4)在空肠，回肠中，腹泻组与空白组其余水通道蛋白mRNA表达量无统计 学差异。 5)结肠，腹泻组与空白组AQPl，3，4，8mRNA表达无统计学意义。 6) C与D组空肠组织中，4种水通道蛋白mRNA表达量与空白组无明显 差异，P均大于0．05． 7)C与D组回肠组织中，4种水通道蛋白mRNA表达量与空白组无明显差 异，P均大于0．05． AQP3，4，8mRNA表达量C，D组与空白组无明显差异，P均大于O．05． 结 论 1． 昆明乳鼠对SAll株易感，对人轮状病毒不易感。 2． 分泌，代偿性表达增加，可以减轻乳鼠腹泻症状。 3． 功能障碍，水吸收量减少，导致粪便稀薄形成水样便。 4． 鼠仍以水样便为主要表现。 5． 轮状病毒肠炎的致泻机制可能与近端结肠AQPl，3，4，8无关。