乳腺癌干细胞生学特性及调控机制研究.pdf

l：海交通人学医学院2006级博士研究生论文 乳腺癌干细胞生物学特性及调控机制研究 摘要 越来越多的证据表明，肿瘤是一种干细胞疾病。乳腺癌的发生、 发展及复发、转移，从根本上说，是由乳腺癌干细胞引起的。而且， 乳腺癌干细胞对化疗、放疗及内分泌治疗都存在抵抗性。同时，肿瘤 干细胞位于特定的微环境中，其为肿瘤干细胞的自我更新提供支持作 用，这些微环境为肿瘤干细胞的治疗提供新的思路。目前，对乳腺癌 干细胞微环境的认识还很不足。为此，我们观察乳腺间质细胞中最主 ．要的细胞成分一成纤维细胞，对乳腺癌干细胞的调控作用。乳腺癌干 细胞基因的网络调控国内外未见报道，我们构建了乳腺癌干细胞基因 调控网络。 一、 乳腺癌干细胞微球体形成影响因素探讨 微球体形成的影响因素，并检测其中CD44+CD24胡ow的表达。 方法： 进行微球体培养。取培养第7天的微球体细胞，用流式细胞术进行干 细胞比例分析。 4-0．3)％， 结果：MCF一7细胞形成微球体的效率最高(2．1 MDA．MB．23 1细胞很少形成微球体，原代乳腺癌细胞未观察到微球 体形成。但在无B27的干细胞培养环境中，MCF．7易贴壁生长。MCF．7 上海交通人学医学院2006级博士研究生论文 单层培养细胞中CD44+CD24胡ow的比例为(2．04-O．1)％，而来源不 1．8 l 的比例分别为(1 4-0．3)％和(8．2 4-3．1)％和 及原代乳腺癌细胞中CD44+CD24讥删的表达分别为(92．2 (93．84-2．4)％。 结论：MCF．7细胞通过微球体培养富集了肿瘤干细胞，而 癌细胞中CD44+CD24舶w的表达与微球体形成不呈正相关。 二、 表阿霉素对乳腺癌微球体细胞和单层培养细胞作用的比较 目的：探讨表阿霉素对乳腺癌微球体细胞和单层培养细胞的不同 作用。 方法：MCF．7细胞在干细胞培养条件下进行微球体培养，噻唑蓝 (thiazolyl 培养细胞的抑制率，流式细胞术分析表阿霉素作用下，MCF．7微球 体细胞和单层培养细胞中CD44+CD24。的表达及细胞周期变化。 的抑制率明显低于对单层培养细胞的抑制率， (脚．01)；400ng／IJL 的表阿霉素作用72 (22．8 4-4．8)％，高于单层培养细胞(3．34-O．8)％，(氏O．01)； MCF．7微球体细胞含有较高比例的G0／G1期(74．334-3．20)％细胞， 4-3．45)％， 高于MCF．7单层培养细胞(53．40 (氏0．01)，表阿霉 素对微球体细胞与单层培养细胞的G0／GI期影响较小，但显著影响S 上海交通人学医学院2006级博上研究生论文 期及G2期的比例。 结论：表阿霉素对MCF．7微球体细胞的细胞毒作用较低，并可 用于富集乳腺癌干细胞，其对微球体细胞G0／G1比例影响较小。 三、乳腺间质成纤维细胞对乳腺癌干细胞的体内外调控研究 目的：体内、体外研究正常乳腺间质成纤维细胞和乳腺癌间质成 纤维细胞对乳腺癌干细胞的调控作用。 方法：分离、培养正常乳腺及乳腺癌间质细胞并进行免疫组织化 学鉴定。不同成纤维细胞与MCF．7微球体细胞共培养并流式细胞术 分析CD44+CD24‘比例。流式分选侧亚群细胞并与不同成纤维细胞接 种NOD／SCID小鼠。小鼠移植瘤HE病理染色。 结果：正常间质成纤维细胞a—SMA表达阴性，而肿瘤问质成纤 维细胞a-SMA表达阳性。共培养后，肿瘤间质成纤维细胞上调微球 体细胞中乳腺癌干细胞的比例，【(21．44-1．8)％】Vs【(17．24-2．3)％】，P 值小于0．05；正常间质成纤维