乳腺癌细胞id mirna真核表达载体构建转染及对mmp9的影响.pdf

乳腺癌细胞IdlmiRNA真核表达载体构建转染及对MMP9的影响 摘要 [目的]：构建IdlmiRNA真核表达载体，并成功转染乳腺癌MDA—MB一231细胞株， 1、删P 筛选稳定表达的乳腺癌细胞株，观察对乳腺癌细胞的对Id 9表达的影响。 [方法]： miR 利用Invitrogen公司网上BLOCK-iTRNAi设计工具，设计针对Id1基因(ID： 体，通过脂质体转染法转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞株，以杀稻瘟霉素筛选稳 定表达的细胞株。经RT—PCR方法鉴定其对Idl、iMP9表达的影响。 [结果]： 成功构建IdlmiRNA真核表达载体，经电泳及测序鉴定正确，转染乳腺癌 方法鉴定，结果表明转染Idl l、MMP l、MMP 其Id 9表达水平低于对照组，且Id 9表达水平正相关。未转染 组与阴性对照转染组无明显差异。 [结论]： 本实验成功构建IdlmiRNA真核表达载体，并成功转染乳腺癌MDA—MB231细胞株， 筛选出稳定表达IdlmiRNA的乳腺癌细胞株，证实干扰有效，并且Idl与mmp9 表达相关，为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异，或详细了解其分子作 用机制奠定了基础。 [关键词]： Idl：MMP9；真核表达载体；乳腺癌细胞株 4 Constructthe vectorofIdlmiRNAand eukaryotic expression transfectbreastcaner theMMP into celllinetoexplore 9expression Abstract constructthemiRNA vectorofIdl and 【Purpose]：To eukaryoticexpression transfecttheMDA—MB一231 breastcancer and cellline， selectthestabilized finally lines．To cells the betweenId1andMMP9 expressed explorerelationship expression ‘ inbreastcaneerlineMDA—MB．231． mJRNAofIdl Was andinsertinto [Method]：Thearray gene designed ； vectorto theIdlmiRNA pcDNA6．2-GW／EmGFP—miRexpression construct eukaryofic vector．rnle infection wasusedtotransfect expression liposome protocol theMDA—MB．231 eelllines．UseBlasticidintosele