乳腺癌细胞il2受体信号转导通路及与syk基因表达之间相互关系的研究.pdf

中文摘要 乳腺癌细胞IL-2受体信号转导通路及与Syk基 因表达之间相互关系的研究 摘 要 IL．2受体表达之间的相互影响，来探讨其相关信号转导途 径，从而初步研究乳腺癌细胞中IL．2受体信号转导通路的 的作用机制和进一步揭示Syk的抑癌作用的实质。 方法： 1用逆转录．聚合酶链式反应(revers PCR， transcription RT-PCR)、蛋白质印记技术(Westernblot)分别检测乳腺癌 细胞MDA．MB．23 MDA．MB．23l中内分泌型IL．2的表达。 l细胞周期、 1 癌细胞MDA．MB．2348h后对IL．2R转导通路下游相关基 因Sn汀5表达的影响。 3 筛选，构建syk基因稳定表达的细胞株MDA．MB．231／syk． 中文摘要 通过Western 腺癌细胞中的表达情况。通过Westem cDNA前后乳腺癌细胞MDA—MB．231中IL．2 检测转染syk cDNA前后 受体的表达变化。用RT-PCR方法检测转染syk 乳腺癌细胞MDA．MB．23 1中IL．2R转导通路下游相关基因 STAT5的表达变化情况。 cDNA 4采用MTT法分析不同浓度rhIL一2对转染syk 前后乳腺癌细胞MDA．MB．231增殖反应的影响。 5 RNA干扰沉默IL．2R 13的表达对syk基因表达的影 IL一2R 13的表达。应用Westemblot、RT-PCR方法筛选最有 效抑制IL．2R13表达的质粒表达载体用于后续实验。应用 Western 的影响。 结果： 1通过RT-PCR、Western blot方法检测，结果显示MD 受体13、Y表达阳性，且Y链的表达要强于13链的表达。 测乳腺癌细胞MDA．MB．231中内分泌型IL．2的表达阴性。 2 1 细胞增殖有明显抑制作用， 药物处理组与对照组比较有显 著性差异(PO．05)，高浓度组与低浓度组比较，对 用呈剂量依赖性和时间依赖性。FCM结果显示IL．2可诱导 中文摘要 MDA．MB．23 l细胞周期阻滞和细胞凋亡。100、500、 1细胞48 2500u／ml的rhlL．2作用MDA．MB．23 h后，Go／Gl 可以剂量依赖性地诱导MDA．MB一231细胞凋亡，细胞凋亡 率随明显rhlL．2浓度升高而增大，与对照组相比有显著性 差异(P0．05)。 3通过RT-PCR、Westernblot方法检测到了MDA．MB ．23 blot 方法检测结果显示转染后IL．2R13链表达增强。用RT-PCR 方法检测结果显示转染后MDA．MB．23l细胞STAT5基因表 达降低，结果有显著性差异(PO．05)。 4