乳铁蛋白在cc大鼠的镇痛作用与no-cgmp-pkg信号通路的激活.pdf

·中文论著摘要· 信号通路的激活 目的 蛋白，广泛存在于哺乳动物的各种体液中，如乳汁、血液、唾液、泪液，胆汁、 精液及胰液等。既往研究表明，乳铁蛋白除了抗炎、抗感染、抗肿瘤及免疫调节 等多种作用外，还在炎性痛过程中产生镇痛作用。但乳铁蛋白是否在神经病理性 痛发挥镇痛作用，如果有镇痛作用，其镇痛作用的分子机制如何，尚需进一步探 constrictionofthesciatic 讨。本研究采用坐骨神经慢性束缚损伤模型(chronic injury nerve，CCI)，从行为学、细胞化学和分子生物学等多层面探讨：(1)乳铁蛋白在 神经病理性痛是否能产生镇痛作用；(2)乳铁蛋白在神经病理性痛的镇痛作用是 否与NO．cGMP．PKG信号通路的激活有关；(3)乳铁蛋白在神经病理性痛的镇痛 作用是否与阿片受体的激活有关；(4)乳铁蛋白产生镇痛作用的不同阶段信号分 kinase G 子蛋白激酶G(proteinPKG)的表达的变化。目的在于证实乳铁蛋白在神经 病理性痛过程中的镇痛作用，阐明其发挥镇痛作用的分子机制，为临床治疗神经 病理性痛提供理论参考和实践指导的依据。 材料与方法 1．大鼠坐骨神经慢性束缚损伤神经病理性痛模型(CCI)的制作 消毒后，沿大鼠右侧后肢大腿外侧切皮，暴露坐骨神经干，用4号铬制羊肠线环 绕神经干分别作4个轻度结扎，结扎间距为1．O．1．5mm，结扎强度以引起同ROd,腿 肌肉轻度颤动为宜。最后缝合伤口。 2．乳铁蛋白对神经病理性痛的镇痛作用 将CCI大鼠分为乳铁蛋白腹腔内注射组和鞘内注射组两个大组，腹腔内注射 剂量组，对照组注射等容积生理盐水，每组动物为8只，用热刺激仪，观测大鼠 withdrawal 后爪回缩潜伏期(paw effect， 腹腔内注射组，将PWL换算为最大可能效应百分数(maximum possible 100(20．给药前PWL)。鞘内注射组，采用曲线下面积法来评价乳铁蛋白的镇痛效 应。 3．乳铁蛋白的镇痛效应与NO．cGMP．PKG信号通路的激活 注射不同剂量的工具药及其等容积溶媒：L-NAME(非特异性一氧化氮合酶抑制 异性PKG抑制剂)、格列本脲(ATP敏感K+通道阻断剂)。每个剂量组8只大鼠， 通过热刺激仪记录大鼠PWL，采用曲线下面积法，分析各工具药对鞘内注射乳铁 蛋白对神经病理性痛大鼠的镇痛作用的影响。 4．乳铁蛋白的镇痛作用与阿片受体的关系 将CCI大鼠随机分为4组，每组8只，鞘内给予100“g乳铁蛋白10min后， 各组分别鞘内注射纳洛酮(非选择性阿片受体拮抗剂)l Ong，CTOP(选择性“阿 片受体拮抗剂)O．1p,g、1．0肛g及等容积生理盐水对照，通过热刺激仪记录大鼠PWL， 采用曲线下面积法，分析纳洛酮和CTOP对鞘内注射乳铁蛋白在神经病理性痛大 鼠的镇痛作用的影响。 5．鞘内乳铁蛋白镇痛过程中PKG的表达 将CCI大鼠分为6组，每组24只，分别为空白对照组(不给药)、生理盐水 铁蛋白100pg+KT5823 2 鼠脊髓标本，免疫组化和westernblot检测PKG的表达的改变。 6．统计学分析 分析数据，组间比较采用单因素方差分析，Tukey’S检验。P0．05认为有统计学意 义。 实验结果 1．乳铁蛋白在神经病理性痛的镇痛作用 CCI大鼠腹腔内注射乳铁蛋白后30min，即产生镇痛效应，最大效应发生在 药后180min，镇痛效应消失。 CCI大鼠鞘内注射乳铁蛋白后30min，即开始产生镇痛效应，持续约180min， 最大效应产生于注射乳铁蛋白后60min，各剂量