- 1、本文档共79页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
人系膜细胞中tfα促进ip
·中文论著摘要·
人系膜细胞中TNFQ促进I
P。R1的表达及相关信号传导
机制的研究
目 的
肝肾综合征(HRS)的主要发病机制是肾小球滤过率(GFR)明显下降。已
知肾小球系膜细胞(GMCs)收缩可引起肾小球滤过面积减少。HRS患者血中肿
少与其对缩血管物质的敏感性有着密切联系。本研究用TNFa处理原代培养的人
表达;并应用信号转导抑制剂及瞬时转染活性失活的负显性突变体质粒检测对
表达的信号通路,以期为肝肾综合征GFR下降的发生机制和防治思路提供理论依据。
材料与方法
1、材料
人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小球系膜细胞培养液(MCM)购至美国
sccience
兔抗人I型IP3R抗体,Chemicon
p-PKCa(thr637)抗体,PKC总抗体购至Celllsingnalingtechnology公司;兔抗人
13-actin多克隆抗体,Santa
物酶标记山羊抗兔二抗,Santa
forNon-RadioactiveDetection
购至Calbiochen公司;PepTagRAssay ofProtein
KinaseCKit,promega公司;EIlllaIlced
RT EX
ReagentKit、PCR试剂盒SYBR@premix
Soh,Inha in
Korea.惠赠(已经大连
粒及pCDNA3.0质粒由Dr.Jae—WonUniversity
宝生物工程有限公司测序分析)。去内毒素质粒小提及中提试剂盒,天能公司;转
染试剂盒:Liprofetamin一2000,invitrogen公司。
2、方法
(1)分组:
3)PMA预处理HMC细胞模型:①TNFa处理Oh组(T0h组)、
(耋)TNFa处理24h组(T24h组)、
③PMA+TNFa处理组(PMA+T组)
4)多种抑制剂预处理删C细胞模型1
(要)safingol处理组(Sa组)、@PPl组(PPl组)、
(重)rottlerin组(rot组)、@U73122组(U组)、
(主)D609组(D组)⑧Sa+T组、@PPI+T组、
@)rot+T组、臼U7+T组、曲D+T组。
5)多种抑制剂预处理HMC细胞模型2
6)阻断PLC,PKC
Q信号通路细胞模型:
(亘)D609+TNFa组(D+T组)。
7)瞬时转染细胞模型:
2
@pCDNA3.0+TNF
8)TNFRl抗体或TNFR2抗体预处理HIdE细胞模型:
(2)应用Westernblot、Refl.time mRNA
PCR方法检测TNFa对HMCs中IP3R1
和蛋白表达的影响。
(3)应用PMA预处理HMCs,Westernblot检测对TNFa诱导IP。Rl蛋白表达的
影响。
PCR
(4)应用多种信号转导抑制剂预处理HMCs,Westernblot和Real.time
方法检测TNFa对HMCs中IP3RlmRNA和蛋白表达的影响。
(5)应用Western
的活化和(或)PKCa蛋白表达的影响。
文档评论(0)