人脂肪来源干细培养鉴定及其向内皮细胞分化能力的研究.pdf

摘要 摘要 目的：通过对人脂肪来源干细胞的提取、培养、鉴定，研究其向内皮细胞的诱 导分化能力，并检测冻存细胞复苏后的生长分化能力，为临床应用提供理论支 持和参考依据。 方法：人脂肪来源干细胞的分离参照Zuk等的方法进行。分离后的细胞接种、 培养并适时传代，每日在显微镜下观察记录其形态特点和增殖特征，并将部分 细胞冻存。消化第3代脂肪来源干细胞，利用流式细胞仪检测内皮细胞表面特 异性标志CD31。将CD31(一)的脂肪干细胞，使用不同的诱导剂向脂肪、骨分化， 分别用油红O和VonKossa染色，证明其多向分化能力，并在VEGF和bFGF诱 导下，向内皮细胞分化，分别用流式细胞仪和免疫组化的方法检测内皮细胞标 志物CD31。复苏冻存的细胞，检测其生长增殖活性和多向分化能力。 结果：从人脂肪组织中分离的脂肪干细胞在体外呈纤维样迅速生长，流式细胞 仪检测细胞表面标志CD31呈阴性，排除其为内皮细胞来源。CD31(一)的脂肪 来源干细胞可在地塞米松、胰岛素和3一异丁基-I-甲基黄嘌呤诱导下，表现脂肪 细胞特性，油红0染色见胞浆内红色脂肪液滴；在地塞米松、维生素C和13一甘 油磷酸钠诱导下表现成骨细胞特性，YonKossa染色见黑色矿化结节；在VEGF 和bFGF诱导下呈内皮细胞特性，免疫组化染色细胞内有着染的褐色颗粒，流式 细胞检测CD31呈阳性：冻存的细胞复苏后其生长和分化能力良好。 结论：成功分离人脂肪来源干细胞，并向内皮细胞分化，且排除其为血管内皮 细胞来源。获得的干细胞易于保存，冻存的细胞复苏后生长和多向分化能力良 好。由此，脂肪来源干细胞有望作为细胞治疗和组织工程的种子细胞，具有广 阔的应用前景。 关键词：脂肪来源干细胞；人；冻存；成骨细胞；脂肪细胞；内皮细胞；诱导； 组织工程 Abstract ABSTRACT thedifferentiationofhuman tissue—dedved Objeet：Toinvestigate ability adipose stem endothelialcells andidentificationof cells(ADSCs)tothroughisolation，culture ADSCsanddetectthe of asto resuscitated theoretic biologic cells，SO ability provide evidenceandreferencefor clinical ofADSCs． application Methods：ADSCswereisolated tothemethoddescribedZuketa1．The according by cellswere observedunder inoculated，cultured,passaged,andmicroscopeeveryday torecordtheir and characteristics．Somecellswerefrozen morphologyproliferating forlateruse．The cellswere todetecttheirsurface third-passagedigested expression