人骨髓间充质干胞对异体t淋巴细胞增殖的影响及其机制的实验研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………7 英文缩写……………………………………………………………………14 研究论文人骨髓间充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖的影响及其机制的 实验研究 前言……………………………………………………………………15一月U舌……………………………………………………………………1 材料与方法……………………………………………………………16 结果……………………………………………………………………23 附图……………………………………………………………………28 附表……………………………………………………………………34 讨论……………………………………………………………………35 结论……………………………………………………………………40 参考文献………………………………………………………………41 综述 调节性T细胞特性及其GVHD防治应用研究进展……………44 致谢…………………………………………………………………………63 个人简历……………………………………………………………………64 中文摘要 人骨髓问充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖 影响及其机制的实验研究 摘 要 目的：利用异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病己经越来越成为血 液病的常规治疗手段，而异基因干细胞移植后GVHD是限制移植技术发 展的最大障碍。如何防治GVHD已经成为这一领域研究的重点。 研究显示，间充质干细胞可能有抑制GⅦD作用。在BMT的同时植 入包含供者骨髓间充质干细胞在内的骨髓作为造血微环境，发生GVHD 的危险性显著降低。进一步研究提示体外培养扩增的人间充质干细胞也可 以减轻GVHD反应，提高异基因干细胞移植的成功率。 中文摘要 的白细胞，Fic011分离液分离单个核细胞。 2．2T淋巴细胞纯化：取处理后的尼龙毛柱，加入PBMNC悬液，37℃， 5％C02饱和湿度孵育1小时，纯化T淋巴细胞。 2．3T细胞纯度检测：取尼龙毛柱纯化前和纯化后细胞，选取CD3．PerCP、 CD4．FITC、CD25．PE单克隆抗体，流式细胞仪检测免疫表型。 3 MSCs与T淋巴细胞共培养 3．1实验分组 A：BMMSCs空白对照组； B：BMMSCs+PHA对照组； C：BMMSCs+T细胞接触培养组； D：BMMSCs+T细胞接触培养PHA刺激组； E：BMMSCs+T细胞非接触培养组； F：BMMSCs+T细胞非接触培养PHA刺激组； G：T细胞空白对照组； H：T细胞PHA刺激对照组； 每组实验重复3次。MSCs：T为l：20。PHA浓度50ug／ml。 3．2 孔，同时按相同条件和密度接种MSC于96孔板，设6复孔，待细胞完 全贴壁后，以60C035Gy照射去增殖处理。 3．3 的6孔板内，用于T细胞表型和PCR检测；同时按相同条件和密度接种 于已制备好MSC的96孔板内，用于细胞增殖检测。加入PHA作为刺激 原，同时分别设置无PHA刺激组作为对照。 3．4 检测。加入PHA作为刺激原，同时设置无PHA刺激组作为对照。 3．5对照组：按相同条件和密度设置单独T细胞和单独MSCs培养组，加 入PHA作为刺激原，同时分别设置无PHA刺激组作为对照。 4 T细胞增殖检测：MTT法检测T细胞增殖活性。 5 量作为内对照，结果采用2tct(13-actin)蛾(Foxp3)】表示。 7统计学分析 SPSS17．0软件分析，分组资料以均数-4-标准差表示，进行单因素方差 分析，Dunnett’SI3法进行两两比较，以P0．05为差异有统计学意义。 结果： 1 骨髓间充质干细胞培养扩增及生物学特性 原代细胞接种后4h部分圆形细胞开始贴壁，24h可见贴壁细胞伸展 为呈纤维状，72小时后可见贴壁细胞呈克隆样生长，8～10d后集落逐渐 增