体外肌腱细胞培及生物学性能的实验研究.pdf

目 录 。中文摘要…………………………………………………………………1 OOOO000OOOOOOO……………OOIOOB…………4 英文摘要………………………D 研究论文体外肌腱细胞培养及生物学性能的实验研究 前言···……-···················…···…··············…·····………······8 日IJ舌””……”一””“””“一”…”…””””“””…“““……””””芍 材料与方法…………………………………………………………8 结果···………···……………………···……………···”．．……“…12 00000000000000 14 附图……………………………………………………0 oooooOOO……28 附表……………………………………………………O OOOOO··············””·····…·OOOOOOOO 讨{仑··········…··············O O“····28 ooooooooooo……32 结论…………………………………………………0 。 参考文献……………………………………………………………32 综述 同种异体肌腱修复肌腱缺损的研究进展及临床应用…………37 致谢·······，····…··············””一”””一””””“．．””““”·OOOOOO．．””50 个人简历…………………………………………………………………51 中文摘要 体外肌腱细胞培养及生物学性能的实验研究 摘 要 目的：肌腱细胞培养是研究肌腱细胞增殖及分泌的基础，是研究术后 肌腱粘连机制的重要途径。本实验以来亨鸡为研究对象，培养及鉴定肌腱 细胞，观察肌腱细胞的生长规则及形态，快速、优质的获得肌腱细胞，为 肌腱细胞的转染及移植提供优质的肌腱细胞。 方法：细胞培养及传代：取来亨鸡14只，体重1～1．5埏，无菌条件 下分离肌腱，显微镜下剪除肌腱外膜组织，用0．25％胰蛋白酶及O．1％胶 原酶将整段肌腱在37℃消化30分钟后将肌腱剪成lmm3大小的碎块，再 用上述浓度的胰蛋白酶及胶原酶混合液在37℃消化1小时。终止消化后 100目滤网过滤去除碎块，滤液经800r／min离心10分钟，弃去上清液， 经细胞计数后将细胞密度调整调至1x105个／ml，接种于培养瓶中培养， 细胞贴壁后每三天换液一次，培养条件为37℃恒温，5％C02浓度，饱和 湿度。当肌腱细胞贴满培养瓶底80％．90％后进行细胞传代培养，吸出培 胞周围变亮、变圆后终止消化，吸出消化液，加入培养液反复吹打至细胞 离壁，细胞均匀悬浮后按1：2分瓶传代培养。 细胞贴壁时间观察：取10个一次性培养皿，分成原代组和传代组， 每组5个，将原代、传代(第二代为例)肌腱细胞悬液分别移至一次性培 养皿中，放入培养箱中培养，每30分钟在显微镜下观察细胞一次，当显 微镜下轻轻挪动培养皿，大多细胞不再随培养液移动时，此即为肌腱细胞 贴壁时间；之后细胞在培养皿底延展、分裂、增殖，当细胞增殖贴满培养 瓶皿80％．90％时为细胞贴壁生长时间。记录lO个培养皿中肌腱细胞贴壁 ．时间、细胞贴壁生长时间，求其平均值。 细胞形态学观察：取第二代细胞消化脱落后离心成团，用2．5％戊二 每级15分钟，用Epon812环氧树脂包埋细胞，固化后修块定位，用超 薄切片机切片50．60nm，3％醋酸铀．枸橼酸