体外诱导视网膜细胞及间充质干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的研究.pdf

体外诱导视网膜干细胞及间充质干细胞向视网膜神经 上皮细胞分化的研究 摘要 网膜神经上皮分化的体外诱导。 方法：用胰蛋白酶分离新生5天(PN5)大鼠视网膜混合细胞，用贴壁培养法，在 10％FBS的DMEM／F12培养基中传代培养，经过连续传代，纯化和诱导细胞。 DMEM／F12无血清体系，诱导人脂肪间充质干细胞。用悬浮法培养胚鼠视网 RT-PCR鉴定诱导细胞的分化情况。 结果：PN5大鼠视网膜混合细胞具有发育成熟RGCs、光感受器及胶质细胞，但仍 表型。经分离的节细胞诱导，AMSCs出现具有神经细胞特征形态的变化， 在低血清环境中，视网膜干细胞经牛磺酸和EGF诱导表达了Thy-I、Tujl和 GS，而间充质干细胞经EGF诱导表达了神经前体细胞标志物Tujl及胶质细 胞标志物GS。 结论：在体外分离PN5的SD大鼠视网膜混合细胞成分符合PN5的视网膜发育。PN5 的视网膜混合细胞中仍存在RSCs。通过高血清体系的传代诱导，可得到具 有RGCs表型的细胞。AMSCs在视网膜类节细胞的环境下，可诱导表达神 经前体细胞的标志物及光感受器细胞的标志物。牛磺酸和EGF都对RSCs向 视网膜神经层分化有促进作用，而且EGF对AMSCs向神经分化的作用更为 显著。RSCs与AMSCs相比更易分化为视网膜神经上皮细胞。为干细胞用于 视网膜移植的细胞供体，提供了体外诱导的依据。 关键词：视网膜干细胞人脂肪间充质干细胞体外诱导神经节细胞 光感受器细胞 5 and In．vitroInductionDifferentiationofRetinalStemCellsand StemCellsintoRetinal Cells Mesenchymal Neuro—epithelial Abstract and thein-vitro for Purpose：Toexplorecompare inductiondifferentiationofretinalstem human stem retinal cells(RSCs)andadiposemesenchymal cells(aMSCs)into cells． neuro-epithelial rat Methods：PN5retinalcellswere andcultured their digestedbytrypsinase byusing wallof adherenttothe cultureflaskinDMEM／F12medium ability supplemented with10％FBS．Thecellswere themethodofcontinual purifiedby passage．The differentiatedRGCswereusedaseellenvironmenttoinducethedifferentiationof AMSCswithEGF+bFGF+B27inDMEM／F12medium．RSCswerecultured