依达拉奉预处理大鼠脑缺血再灌注损伤的抗细胞凋亡保护作用.pdf

内 容 摘 要 目的：观察大鼠缺血再灌注后大鼠神经功能缺损，梗死灶面积百分比，梗死区神 经元的凋亡指数,与细胞凋亡基因有关的bcl-2、bax、hsp-70蛋白表达等变化，运用 依达拉奉预处理进行干预，观察上述指标在大鼠缺血再灌注模型中的表达情况，探讨 依达拉奉预处理对脑缺血再灌注损伤的抗细胞凋亡等神经保护机制，并为脑血管性疾 病二级预防提供新的途径。 方法：将SD大鼠随机分为假手术组，依达拉奉预处理组（预处理组），依达拉奉 后处理组（后处理组），预处理对照组，后处理对照组等 5 组。采用改良的 longa 线 栓法建立局灶缺血再灌注模型。造模前3天，预处理组预防给予依达拉奉干预，每日 一次，3mg/kg, 采用腹腔注射的方式。造模成功后，术后立即、12h、24h、36h、48h 预处理组、后处理组给予依达拉奉干预。 在采集标本前，对大鼠进行神经功能缺损评分。取标本后，根据TTC染色判断梗 死灶面积百分比；HE 染色检测脑组织病理形态学改变；通过 TUNEL 法来检测梗死区 神经元的凋亡指数（AI）；免疫组化法检测脑组织中 hsp-70 和 Bcl-2、bax 蛋白表达 情况。 结果：脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分显示，预处理组和后处理组评分与假 手术组比较明显增高，与对照组比较明显降低，而预处理组评分低于后处理组。 TTC染色结果显示，假手术组无明显梗死现象，预处理组和后处理组较对照组大 脑中动脉供血区梗死面积明显缩小，预处理组梗死面积较后处理组小。 脑组织病理形态学检测表明，光镜下假手术组大鼠皮层各层细胞排列整齐，神经 元结构完整，神经基质无水肿，神经纤维无损坏。对照组大鼠显示大脑皮层细胞排列 紊乱，神经细胞水肿，胞核淡染，核固缩，尼氏小体减少或者消失，树突轴突减少， 血管周围间隙增宽等变化；预处理组和后处理组见大脑皮质椎体细胞和脑实质神经细 胞结构清楚，核固缩、核溶解程度较对照组明显减轻，轻度水肿，病变范围明显缩小。 TUNEL 法检测结果显示假手术组大鼠大脑皮质未见 TUNEL 阳性细胞。预处理组 和后处理组，脑缺血再灌注周围皮质可见明显阳性细胞，与对照组比较有显著差异性。 预处理组在TUNEL 阳性细胞数少于后处理组。 免疫组织化学技术检测结果显示假手术组大鼠大脑皮质未见bcl-2、bax、hsp-70 阳性细胞；与对照组比较，预处理组和后处理组bcl-2、hsp-70蛋白的表达量明显增 多；而 bax 蛋白表达明显减少。预处理组与后处理组比较，bcl-2、bax、hsp-70 蛋 白的表达均有差异性。 结论：在大鼠缺血再灌注模型中，大鼠出现神经功能缺损、梗死灶等表现，给予 II 依达拉奉干预后，大鼠神经功能缺损有所改善、梗死灶缩小等，说明依达拉奉起到了 脑神经保护作用。进一步证实了脑缺血再灌注后, 脑缺血再灌注周围皮质 Bcl-2、 bax、hsp-70蛋白表达发生了变化，说明细胞凋亡机制参与了脑缺血再灌注损伤。给 予依达拉奉预处理组干预后，Bcl-2、hsp-70蛋白的表达增加，而TUNEL阳性细胞数 量、bax蛋白的表达减少；与后处理比较也有显著差异，说明依达拉奉能有效抑制bax 的表达，上调 Bcl-2、hsp-70 的表达，抑制细胞凋亡，减轻脑组织损伤,增强细胞对 缺血再灌注的耐受性。 关键词：凋亡 缺血再灌注 依达拉奉 BCL-2 BAX HSP-70 III Abstract Objective Observed in rats after ischemia-reperfusion in rats neurological deficit, the percentage of infarct size, infarct neuronal apoptosis index, and apoptosis-related genes bcl-2, bax, hsp-70 protein expression and other ch