促红细胞生成素疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的观察.pdf

复旦大学博士论文 摘要 中文摘要 促红细胞生成素治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的观察 第一部分促红细胞生成素治疗小鼠实验性变态反应性脑脊链炎 Autoimmune (Experimental 髓炎性细胞浸润，应用流式细胞仪观察脑和脊髓细胞亚群以及相关细胞因子。结 EPO可改善EAE小鼠临床症状，减少病灶浸润炎性细胞以及炎性因子。 第二部分促红细胞生成素受体表达 目的：观察EPO受体在外周免疫细胞和中枢胶质细胞上的表达。方法：从EAE 脾脏和外周淋巴结中提取单个核细胞，并进一步纯化提取CD4+T细胞；培养并鉴 定原代星型胶质细胞和小胶质细胞；应用RT-PCR观察EPO受体的表达。结果： 在外周，EPO受体可表达在单个核细胞，但不表达在CD4+T细胞；在中枢，EPO 受体均可表达在静息态和LPS激活态的星形胶质细胞和小胶质细胞。结论：EPO 受体在外周免疫细胞和中枢胶质细胞上均有表达。 第三部分EPO对外周单个核细胞免疫功能的影响 目的：探讨EPO是否可通过对外周免疫细胞的作用而实现对炎性细胞功能的抑制。 (Mononuclear (P0．05)：PHA非特异性刺激后，MNCe的IL．17、IL．23、IL．6和IFN．Y低于 复旦大学博士论文 摘要 有关。 第四部分EPO对星形胶质细胞与EAE免疫细胞相互作用的影响 目的：探讨EPO可否通过对星形胶质细胞作用，影响它们同EAE小鼠外周免疫 细胞的相互作用。方法：EPO处理静息态和LPS／IFN吖激活态星形胶质细胞后， 殖；利用细胞免疫化学和流式细胞仪，观察MHC．II表达水平的差异。EPO处理 前后，静息态和LPS／IFN吖激活态星形胶质细胞，分别以1：1或1：5比例同MNC 表达。结果：1)EPO抑制静息态星形胶质细胞IL．6和LPS激活态星形胶质细胞 胞增殖以及一氧化氮(nitric 态星形胶质细胞经EPO处理后，可使其与CD4+T细胞以l：1比例共培养中IL．6、 表达。EPO预处理的星形胶质细胞可在与免疫细胞共培养中抑制IL．17或(和) IFN吖，其机制可能同下调MHC．II和(或)IL．23等有关。 第五部分EPO对小胶质细胞与EAE免疫细胞相互作用的影响 目的：探讨EPO可否通过对小胶质细胞作用，影响它们同EAE小鼠免疫细胞的 和RT-PCR等方法，观察细胞因子变化；LDH测定观察小胶质细胞死亡；利用细 胞免疫化学和流式细胞仪，观察MHC．II表达水平的差异。EPO处理前后，静息 胞共培养，应用ELISA观察细胞因子分泌，流式细胞仪观察MHC．II表达。结果： 复旦大学博士论文 摘要 对静息或激活态小胶质细胞的预处理，使得其与免疫细胞共培养中IL．17和 (或)IFN-7降低，其机制可能同下调IL．23和MHC．II表达有关。 结 论 1．EPO可减轻EAE病灶炎性细胞浸润，改善临床症状。 2．外周单个核细胞和中枢胶质细胞上均有EPO受体表达，EPO可直接作用于这 些细胞，但CD4+T细胞并不表达EPO受体。 IL．27产生，而EPO则可抑制这些功能分子的表达。 4．EPO可促星形胶质细胞增殖和NO释放。 5． 脾脏以及外周淋巴结组织中的单个核细胞是EAE主要的免疫效应细胞，EPO 可以抑制外周单个核细胞IL．17、IFN-Y等炎性因子产生。 6．与未经EPO处理的胶质细胞相比，EPO预处理的静息态以及激活态星形胶质 细胞或小胶质细胞，可在与免疫细胞共培养中抑制IL．17或(和)IFN吖，其机 制可能同下调IL．23或(和)MHC．II等有关。 关键词： 实验性变态反应性脑脊髓炎 促红细胞生成素 星形胶质细胞 小胶质细胞 单个核细胞 细胞因子