全反式维甲酸影肝癌细胞株bel-7402增殖、凋亡与cks表达的相关性研究.pdf

全反式维甲酸影响肝癌细胞株 BEL．7402增殖、凋亡与Cks表达的相关性研究 中文摘要 背景与目的： 原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是世界上常见的恶性肿瘤之一， 其恶性程度高，发展迅速，若治疗不及时或治疗方案选择不当，平均生存时间为 半年。中国是HCC高发区，约占全球患者的55％，而厦门市同安区是中国两大 肝细胞癌高发区之一，年发病率在十万分之三十以上。由于肝细胞癌早期不易发 现，患者大多错失最佳手术时机。目前的常规化疗药物疗效不佳，致使肝细胞癌 的治愈率较低。因此，研究HCC的发生发展机制，探明重要的相关基因，将为 HCC的诊治提供新的思路，对攻克肝细胞癌意义重大。本课题以人肝癌细胞株 BEL-7402为研究对象，通过检测全反式维甲酸对肝癌细胞增殖、凋亡以及Cksl、 Cks2基因蛋白表达的影响，分析瘤细胞增殖、凋亡与Cksl、Cks2表达的相关性， 初步探讨可能存在的作用机制，为全反式维甲酸治疗肝癌提供理论和实验依据， 为Cksl、Cks2基因及蛋白进一步的实验研究积累经验。 方法： ATRA至终浓度为(O．1，l，5，10，20)11mol／L，对照组只加相应量的RPMI1640， h、48h、72 分别于加药后继续培养24 h、96 h检测各组细胞和对照组及相邻实 验组间增殖抑制率的差异。 2、流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测ATRA对BEL．7402细胞周期及凋 11 亡的影响，实验组加入相应量的ATRA至终浓度为10mol／L，对照组加入l ‰的无水乙醇，于加药后继续培养24h、48h、72 h检测各组细胞周期分布和凋 亡的差异。 影响，实验组加入相应量的ATRA至终浓度为10‘Imol／L，对照组加入1‰的无 水乙醇，于加药后继续培养24h、48h、72 h检测各组细胞之间Cksl、Cks2基 因mRNA表达的差异。 Il 1．t 蛋白表达的影响，实验组加相应量的ATRA至终浓度为10mol／L，对照组加入 h、48h、72 1％0的无水乙醇，于加药后继续培养24 h检测Cksl、Cks2、P27蛋 的影响。 结果： l、ATRA对BEL．7402细胞增殖具有明显的抑制作用，抑制效应呈现明显的 1．t 时间、剂量依赖性。lO 小时抑制率达到50。23±2．44。各组之间的吸光度A值和抑制率IR相比差异有显 著统计学意义(尸0．01)。 2、BEL．7402细胞经10umol／L ATRA作用后，细胞周期各期细胞比例发 生明显变化，随培养时间延长，Go．Gl期细胞比例不断增高，细胞大量阻滞在Go．Gl ±1．13，S期细胞比例相应下降，G2／M期细胞比例各组之间差异无统计学意义(尸 0．05)。 ． 3、lO p O．45，并随作用时间延长，细胞凋亡率不断增加，72小时凋亡率达到17．3l±1．00， 实验组和对照组及各时间组间比较差异有显著统计学意义(PO．01)。 4、ATRA对Cksl、Cks2基因mRNA表达无明显影响(尸0．05)。 积分相比差异均有显著统计学意义(PO．01或PO．05)。 ．o‘、 结论： l、全反式维甲酸对BEL．7402细胞具有明显的增殖抑制作用，并呈现一定 的时间、剂量依赖性。 2、全反式维