内异症黄体中期宫内膜细胞在体外gnrh-a影响下hoxa10、integrin αvβ3的变化.pdf

◇!三型! 内异症黄体中期子宫内膜细胞在体外GnlⅢ-a影响下 HoXAl0、Integrin唧p3的变化 专 业：妇产科学 硕士研究生：余莎 指导老师：谢梅青副教授 摘 要 子宫内膜异位症(下称内异症，EMs)是引起女性不孕症的常见原因。EMs 引起的盆腔粘连、卵巢功能损害、盆腔内环境恶化等是导致卵子输送障碍、不排 卵、胚胎种植失败或早期流产的重要因素。对EMs不孕患者行体外受精胚胎移植 (IVF—ET)时胚胎移植率高妊娠率低，其重要原因之一是子宫对胚胎的接受性(子 宫内膜容受性)下降导致胚泡着床障碍。已有文献报道内异症患者在位子宫内膜 种植窗期胚胎容受性的标记物表达异常：整合素吖D3及H0xAlO基因表达在EMs 患者中最低。 目前，对于内异症合并不孕患者首选腹腔镜手术治疗。有报道重度子宫内膜 ho姗one releasing 了抑制卵巢功能造成的低雌激素环境促进内异症病灶的萎缩，减少术后粘连，改 善腹腔内环境，GnRH—a也可直接作用于异位的内膜组织，引起异位内膜细胞的凋 对子宫内膜细胞生长的影响已得到证实。有研究显示：种植缺陷患者子宫内膜整 后妊娠率与整合素州B3阳性表达的对照组患者无差异，认为GnRH—a治疗可能 重塑了子宫内膜整合素avB3的表达，从而有助于提高子宫内膜的胚胎容受性。 ◇!点兰要 有较多的研究报道：内异症患者的在位子宫内膜与非内异症患者的子宫内膜 存在分子生物学差异，内异症患者在位子宫内膜的某些特质也可能是子宫内膜容 受性下降的原因。在体内，GnRH—a主要通过对下丘脑一垂体一卵巢轴的降调节作 用，降低血清的雌激素水平，使子宫内膜生长受抑制。同时可能存在GnRH—a局 部作用，使在位子宫内膜发生相应的变化，从而有利于改善子宫内膜的容受性。 综上所述，GnRH—a治疗可以通过对卵巢功能的降调节造成体内低雌激素水 平，促进内异症病灶的萎缩，以及对在位子宫内膜的功能有调整作用。还可能通 过子宫内膜的GnRHR，对子宫内膜发挥直接调节作用。我们旨在通过本研究了解 内异症患者黄体中期子宫内膜细胞HOXAlO、整合素吖B3mRNA表达，并探讨内异 变化。 材料与方法： 收集黄体中期子宫内膜标本，术后病理诊断无子宫内膜病变并证实是处于分 泌中期的子宫内膜。分别来自实验组：有不孕症病史的因子宫腺肌病或卵巢子宫 内膜异位囊肿手术治疗的患者7例；对照组：已正常生育的非子宫内膜异位症、 非子宫内膜病变、非恶性肿瘤的入院手术患者5例。手术患者年龄25～40岁， 术前3个月未使用激素治疗，月经周期规则。使用亮丙瑞林(GnRH—a)、17B雌 二醇+黄体酮，分别作用于两组子宫内膜细胞，进而检测HOXAlO、整合素0cv、整 合素D3mRNA表达，以B—actin为内参。 实验内容包括： 1、实验组及对照组原代子宫内膜间质及腺上皮细胞的培养 2、雌二醇、黄体酮、亮丙瑞林对子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞存活率的影响 (MTT法) 3、雌二醇、黄体酮、亮丙瑞林对子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞凋亡率的影响 (流式细胞检测法) 4、雌二醇、黄体酮、亮丙瑞林对子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞HOxAlO、整合 RT—PCR法) 素洲、整合素B3mRNA表达的影响(Realtime 结果： 1、实验组和对照组细胞外观特征相似，接种24h后基本都能够贴壁，原代接种后 n ◇!立2 内异症黄体中期子宫内膜细胞在体外Gn删．a影响下HoxAlo、Integrin州p的变化 3～7天接近铺满。实验组与对照组的两种细胞生长曲线无差异(PO．05)。间质 细胞纯度率可达97％以上：腺上皮细胞纯度率约95％。 2、经亮丙瑞林预处理后的E2+P实验组与单用E2+P的实验组比较，间质细胞 细胞各基因表达降低；而经亮丙瑞林处理后的E2+P对照组与单用E2+P的对 照组比较，间质细胞三种基因表达量增加，腺上皮细胞HOXAl0、整合素93 mRNA表达量增加。 3、经亮丙瑞林预处理后的E2+P实验组、单用E2+P的实验组、空白的实验组间质 细胞HOxAl