压力性尿失禁患基因表达谱及相关基因多态性研究.pdf

北京协和医学院中国医学科学院博士研究生论文 摘要 研究背景 continence 国际尿控协会(internationalsociety，SCI)明确规定，在腹压 增加时出现不自主的尿道内尿失禁称为压力性尿失禁(SUI)。女性压力性尿失禁的 发病率在40％左右，国际尿控协会将这一常见的中、老年人病视为一种国际性疾病 加以研究。并认为其构成了社会和卫生问题，与盆腔器官脱垂(POP)共同被称为盆 底功能障碍性疾病(PFD)。压力性尿失禁的病因和发病机制很复杂，有多因素参与， 不单纯是解剖学理论，已经演变到功能性和解剖学并重的理论。生物体只有当它们 受到一定因素影响，行使特定功能时，相关的基因才会表达。因此基因表达能揭示 很多生物学过程。对环境、遗传或者生化信号发生反应时，基因表达会被激活或抑 制数倍甚至数千倍，形成了特征性的基因表达图谱，称为某一生理／病理现象的“分 子图像”，可以用于了解基因的功能和调控途径之间的相互关系，有助于对生物体 发生的生理生化过程的认识。随着90年代中期微阵列芯片技术的应用，特别是人 类基因组计划的完成，可以利用基因表达谱芯片得到组织标本的“分子图像，然 后对不同病理生理条件下得到的“图像”进行平行表达比较，从而在更深的水平认 识器官的生理或病理现象。 研究目的 应用基因表达谱芯片研究SUI中的基因表达情况，筛选在SUI和正常对照之 间差异表达的基因，并对相关的差异基因进行验证；通过比较绝经前后压力性尿失 禁妇女差异表达基因mRNA和蛋白质水平表达，进而分析女性激素对SUI发病相关 基因表达的调节机制，探讨SUI发生发展的分子机制。通过差异基因多态性与SUI 易感相关性的研究，循征SUI发病的遗传学因素。 研究方法 1．在绝经状态、年龄、体重指数、产次、盆腔手术史等影响SUI发生的重要因素 匹配的前提下，选取3例绝经后SUI与3例绝经后无SUI对照的尿道旁阴道组 织标本。提取总RNA，并对总RNA进行定量、质检。采用RNA扩增标记法合成生 GenomeU133Plus2．0芯片杂交。 物素标记的cRNA，与Human 12，FC值大于2或小于0．5的差异表达基因。用 2．用SAM软件筛选IScore(d)I MAS2．0软件对差异表达基因进行基因功能分类注释(GO)和代谢通路分析 ． (Pathway)。 3．实时荧光定量PCR、免疫组化技术、WesternBlot技术检测绝经后SUI组和绝 经后正常对照组差异表达基因mRNA水平和蛋白水平的表达，从而验证芯片的准 确性，以进一步分析差异表达基因的功能。 Blot技术检测绝经后SUI组和绝 4．实时荧光定量PCR、免疫组化技术、Western 3 北京协和医学院中国医学科学院博士研究生论文 经前SUI组差异表达基因mRNA水平和蛋白水平的表达，分析女性激素对SUI发 病相关基因表达的影响。 5．聚合酶链反应一限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)分析差异基因多态性与SUI 易感的相关性。 研究结果 1．提取总RNA经定量和电泳检测，质量满足芯片杂交要求。杂交后芯片的各项检 测参数均达到质控要求，尿道旁阴道壁组织与基因表达谱芯片的杂交模型建立 成功。 2．筛选出75个在SUI组和对照组之间差异表达的基因。其中包括3个功能未知的 基因。31个基因在SUI组中表达上调，44个基因在SUI组中表达下调。差异基 因涉及多种功能蛋白和代谢通路。其中SNARE神经递质传递通路、神经变性通 路的相关基因变化最显著，包括GOSRl、ApoE、GRB2、GBA基因。 芯片结果一致。 白表达下调，差异无统计学意义。 5．SUI组和对照组ApoE等位基因频率经H．W．平衡定律检验，具有群体代表性。ApoE 的3种等位基因频率及6种基因型在SUI组和对照组分布无统计学差异，SUl人 群危险性等位基因e4的频率高于对照组；保护性等位基因e3的频率低