厌氧菌联合介入疗肝癌的实验研究.pdf

博士论文 厌氧菌联合介入治疗肝癌的初步研究 张学彬 中文摘要 第一部分Buffalo大鼠移植型肝癌模型的生物学特点及影像表现 目的评价一种新的大鼠原位肝细胞癌模型的磁共振、数字减影血管造影、 生物学特点变化及病理特征，促进大批量小动物肝细胞癌介入治疗研究。 或右叶。造模后第7和14天行M砌平扫及增强扫描并分别取荷瘤大鼠各3只行 病理检查。14天后荷瘤鼠14只分别经胃十二指肠动脉(7只)或静脉(7只) 插管行肝动脉和门静脉造影，了解移植瘤DSA血供特点。其余10只荷瘤鼠长期 观察生存状况。 结果造模后第7天，MⅪ观察见30只大鼠均有肿瘤生长，肿瘤平均体积 为19．53±15．65mm3；14天后增大到400．33±242．34mm3。肿瘤在TlWI为低信 号，T2WI为高信号，增强后呈结节状或明显不均匀强化。7例大鼠DSA显示肿 瘤供血动脉均有不同程度增粗扭曲，实质期呈结节状染色3例或环状不均匀染色 4例。7只大鼠门静脉造影均无明显供血。肿瘤包膜完整，中央可见坏死。免疫 组化显示肿瘤甲胎蛋白呈强阳性表达。10只荷瘤大鼠平均生存期为50．80±4．44 天。 结论Buffalo大鼠McA．RH7777肝细胞癌，具有同人类肝细胞肝癌相似的 MRI和DSA表现，非常适于进行大批量的介入治疗实验研究。 关键词癌，肝细胞；疾病模型，大鼠；磁共振成像；放射学，介入性； 6 博士论文 厌氧菌联合介入治疗肝癌的初步研究 张学彬 第二部分厌氧条件下长双歧杆菌对体外培养的MeA-RH7777肝癌 细胞生长及VEGF表达的影响 目的：探索厌氧条件下长双歧杆菌对体外培养的大鼠McA．RH7777肝癌细 胞的毒性及对其VEGF表达及分泌的影响。 材料和方法：采用细胞培养技术，以大鼠肝癌细胞McA．RH7777为靶细胞， 将McA．RH7777肝癌细胞分为两组，A组(厌氧培养条件下加入长双歧杆菌) WST-l比色法测定长双歧杆菌对癌细胞毒性(OD值)。应用ELISA测定上清液 中Oh、12h、24h、48h、72hVEGF蛋白含量，使用RT-PCR法分析厌氧培养72h 后两组细胞VEGFb表达水平。 结果：将长双歧杆菌加入体外培养的McA．RH7777肝癌细胞中显示出细胞 毒性和对该细胞系的抑制效应。作用12h后，细胞生长开始出现停滞呈球形：细 胞浆内出现颗粒状物。72h后培养液内细胞碎片出现。厌氧培养条件下，细胞损 伤随时问的延长逐渐加重，A组毒性更大，48小时后两组OD值具有显著差异。 学差异。72小时后A组厌氧培养的细胞VEGFmRNA表达水平明显高于B组。 结论：在厌氧条件下长双歧杆菌对体外培养的McA．RH7777肝癌细胞具有 明显毒性。癌细胞VEGFmRNA表达上调，但上清液中总VEGF含量在各时间 点均未见显著增高。 关键词：肝癌细胞；长双歧杆菌；EL|SA；RT--PCR；WST-l：VEGF； 博士论文 厌氧菌联合介入治疗肝癌的初步研究 张学彬 第三部分 MRI检测超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记长双歧杆菌和 C．novyi-NT的实验研究 目的探索超顺磁性氧化铁标记长双歧杆菌或C．novyi-NT及采用MRI检测 的可行性。 材料与方法体外实验中四组不同组分的培养管厌氧条件下培养：(1) MⅪ扫描，并重建出R2’mapping和R2mapping，测 T2‘mapping和T2mapping 量R2事和R2值。同样的处理方法(RCM培养基)用来标记和检测C．novyi-NT。 建立Baffulo大鼠肝癌皮下瘤模型及肝原位瘤模型各8只用于体内实验。大鼠皮 la la Fe／m1)及Free．SPIO(28Fe／m1)各 下瘤直接瘤内注射B．10ngum—SPIO(28g g l