基质金属蛋白酶小体积肝移植物早期损伤作用机制的实验研究.pdf

中文摘要 第一部分 不同体积肝移植物早期MMP-2D差异性表达研究 目的：观察不同体积肝移植大鼠术后早期移植物MMP．2／9表达和活化的特点， 探究MMP．2／9在不同体积移植物差异性表达的潜在机制，进一步探讨MMP．2／9 在小移植物早期损害的作用。 方法：108只SD大鼠分为3组：100％肝移植、50％肝移植和25％肝移植组。分 别检测移植物灌注后0．5、6、12、24、48和72小时的门静脉压力；肝功能(ALT、 明胶酶谱和免疫组织化学方法检测各组移植物MMP一2／9蛋白量、基因水平、酶 活性和组织中表达与定位。 结果：与全肝移植物比较，灌注后6．24小时MMP．9表达在小体积移植物明显升 期表达集中在肝移植物门静脉周围，与门静脉压力变化密切相关(火0．05)。25％ 肝移植物灌注后6h内MMP．9活性较其他两组明显升高(P0．05)，并伴随了移 植物肝窦扩张、出血、门静脉结构破坏。MMP．9表达和活性增高与小体积肝移 植物严重的缺血再灌注损伤存在相关性，表现为肝功能(ALT、TB)指标损害， 无统计学差异。 结论：MMP．9在小体积移植物早期表达和活性显著增加，移植术后门静脉高压 (门静脉高灌注)可能是触发MMP．9活化和表达的重要原因。MMP．9是小体积 肝移植物早期重要的致损伤因素，而MMP一2表达与小移植物早期损害无相关性。 第二部分 MMP．2／9活性抑制对小体积肝移植物早期损害的作用 目的：通过早期抑制MMP．2／9活性来观察对小体积肝移植物损伤和移植受体生 存率的影响，进一步验证MMP．2／9对小移植物早期损害的作用。 方法：SD大鼠分为3组：100％肝移植、25％肝移植和25％肝移植联合CTT Bcl．2)的水平；采用ELISA，Real．timePCR，明胶酶谱和免疫组织化学方法检 基厦全厘蛋自酶盟丛!焦麴赶整揎堑呈翅塑鱼佳旦扭剑盥塞坠硒塞 复旦盔堂盟±堂鱼迨窒 测各组移植物MMP．2／9蛋白量、基因水平、酶活性和组织中表达与定位：三组 再各选取10只模型大鼠进行为期2周的生存率观察。 结果：与全肝移植组比较，25％移植组灌注后6h出现MMP．9表达明显增高，并 在12h达到峰值，MMP．2表达在各组无明显差异。与无干预小移植物组比较，经 改善，部分凋亡相关蛋白表达明显改变(P0．05)，并且移植受体生存率明显提 高(PO．05)。 结论：MMP．9活性抑制可以显著改善小体积肝移植物早期损害，并提高小肝移 植受体生存率。 第三部分 MMP-2／9活性抑制对小体积肝移植物术后肝再生的影响 目的：观察早期抑制MMP．2／9活性对小体积肝移植物术后肝再生的影响。 方法：SD大鼠分为4组：75％肝切除、100％肝移植、25％肝移植和25％肝移植 联合CTT(Mc＼佃．2／9活性抑制剂)干预组。观察各组术后24和48h门静脉压力、 LI)、CD34标记 肝细胞有丝分裂指数(MI)、溴脱氧核苷尿嘧啶标记指数(BrdU 微血管密度(MVD)以及术后HGF、IL．6、TNF．a基因表达水平的变化。 结果：肝切除组术后肝再生活性最强，表现为肝细胞增殖指数(MI)、BrdU标记 后再生活性减弱，肝再生进程的峰值时点后移；四个实验组中，全肝移植物肝再 生活性最低(P0．05)；而CTT干预后48d,时的各项指标与未治疗小移植物组无明 显差异。75％肝切除组与各移植组比较，HGF、IL．6、TNF．a表达水平均明显增 TNF．a表达无明显差异(胗O．05)。 结论： MMP．9活性抑制对小体积肝移植术后早期肝再生无明显负面影响。 关键词：肝移植；小体积肝移植物；基质金属蛋白酶；缺血再灌注损伤；门静 脉高灌注：肝再生：凋亡。 基厦全厘童自醒过型!签壑赶整撞物呈翅塑鱼佳题扭剑的塞坠班塞 复旦盍堂熊±堂鱼途塞 Abstract PartI ofMatrix CorrelateswithAcute Overexpression Graft MetalloprOteinase．9 inRats