妊娠期母体亚临甲减对后代智力和脑发育相关基因表达影响的动物实验研究.pdf

·中文论著摘要· 妊娠期母体亚临床甲减对后代智力和脑发育相关基因 表达影响的动物实验研究 目 的 甲状腺激素对于中枢神经系统的分化和发育具有十分广泛而显著的影响，胎 儿期和出生后早期甲状腺激素缺乏将造成不可逆的脑损伤，引起严重的感觉、运 动障碍和智力低下，其发病时间、严重程度及开始甲状腺激素治疗的时间等因素 均与脑损害的发生和恢复密切相关。造成胎儿甲状腺激素缺乏的原因包括妊娠期 母体甲状腺激素的减少如甲状腺功能减退症(甲减)、胎儿甲状腺激素减少如先天 性甲状腺缺如以及因妊娠期碘缺乏导致的母体和胎儿甲状腺激素均减少。母体临 床甲减及碘缺乏对胎儿和后代智力的影响已经明确。妊娠期母体亚临床甲减导致 后代智力障碍目前已有数篇报导。妊娠期母体亚临床甲减的患病率为2％～3％， 如此庞大的女性患病人群存在，提示甲状腺激素缺乏带来胎儿第一阶段脑发育影 响的普遍性和重要性。但是母体亚临床甲减对后代脑发育影响的机制研究尚未见 报道。本实验在成功建立亚临床甲减孕鼠动物模型的基础上，观察母鼠亚临床甲 减对仔鼠行为学改变的影响，并从脑发育相关基因表达方面探讨母体亚临床甲减 导致的胎儿脑发育障碍的机制。 方 法 假手术、皮下等量注射尘理盐水，作为阴性对照；②亚临床甲减组：手术切除甲 状腺，于背部皮下植入微渗(osmotic 浓度持续泵入，当血清TSH高于正常、但n水平在正常范围时，提示亚临床甲 减鼠建模成功。十大后‘j正常的雄鼠合笼交配，雌鼠镜下阴道涂片发现精子确定 至仔鼠生后10d，将分娩当日定为PO天；⑧完全甲减组：阳性对照组、手术完全 切除甲状腺，皮下等量注射生理盐水，作为阳性对照。母鼠于E10、E13、E17、 取海马组织，以Real．timePCR方法检测BDNF、NCAMmRNA表达量，以Western 断头取脑，以HE染色、尼氏染色方法观察亚临床甲减仔鼠脑病理改变及神经细 胞形态学改变，仔鼠出生后P40行Morris水迷宫行为学检测并与同日龄对照组比 较。应用SPSSl2．0软件处理和分析数据。 幺b 里 二口 木 l、亚临床甲减孕鼠模型的制备：孕鼠血清TSH、丌4水平结果显示：与假手 见明显改变，而TSH水平明显升高(尸O．05)；与完全甲减组比较，各孕龄亚临 床甲减组表现为血清仉水平明显升高，TSH水平明显降低(尸O．05)，符合亚 临床甲减激素血清学改变。 2、亚临床甲减孕鼠后代发育及激素水平：正常对照组仔鼠活动好，体重增加 快，毛发发育正常；亚临床甲减组仔鼠各方面未见明显异常；甲减组仔鼠睁眼较 对照组迟3～5天，体形偏小，尾短，行动迟缓，步态不稳，毛发出现迟缓且稀疏， 进行Morris水迷宫测试时，亚临床甲减仔鼠血清激素水平和对照组无统计学差异； 完全甲减组仔鼠体重低，血清订4水平显著低于同日龄对照组(尸O．01)，TSH 较同同龄对照明显升高(P0．01)。 3、Morris水迷宫行为测定结果：定位航行试验中，随着训练次数的增加，各 组的逃避潜伏期总的趋势是不断缩短，第9次训练结束，即学习训练结束时，对 4- 照组逃避潜伏期为18．234-4．27s，亚临床甲减组为35．634-5．95s，甲减组为55．16 (撤离平台当日)时，正常对照组仔鼠在靶象限内游泳的时间明显长于其它象限， 2 亚临床甲减组仔鼠在靶象限内游泳的时间也长于其它象限，与对照组比较无显著 性差异(P0．05)，而完全甲减组仔鼠，在各个象限内游泳的时间差别不明显， 测量大鼠的长时空间记忆能力实验中，正常对照组仔鼠在靶象限内游泳的时间仍 明显长于其它象限，而亚临床甲减组仔鼠在靶象限内游泳的时间与其它象限游泳 时间无明显差异，与对照组比较有显著性差异(P0．05)。完全甲减组后代，在 各个象限内游泳的时间差别仍不明显，与对照组比较有显著性差异(尸0．05)。 4、亚临床甲减组仔鼠海马CAl区HE染色可见神经细胞排列较整齐，层次 较清楚，无核固缩，其细胞形态同正常对照组仔鼠相比无明显差异；亚临床甲减 组仔鼠海马尼氏小体染色的